| 초록 |
□ 연구개요 MicroRNA 합성에 핵심 유전자인 Dgcr8이 자궁 세포 특이적으로 결핍 (Dgcr8 cKO) 된 생쥐모델을 분석하여 자궁 내 microRNAs의 기능을 연구하고자 한다. 자궁은 다양한 세포로 구성 되어 있으며 각각의 세포들은 자궁의 생리적 환경 변화에 중요한 기능을 담당한다. 따라서 본 연구에서는 다양한 Cre 마우스 모델을 이용하여 구축된 Dgcr8 cKO 생쥐 모델들에서 조직학적, 생리학적, 분자생물학적 접근법을 사용하여 자궁 내 cell-type specific 한 microRNAs 중요성에 대한 새로운 정보 도출 및 타켓 유전자 발굴을 목표로 한다. □ 연구 목표대비 연구결과 자궁 세포 특이적 Dgcr8 결핍 생쥐 모델을 이용한 표현형 탐색 및 microRNAs 기능 이해 1. Dgcr8 cKO 생쥐의 생식능력 분석 실험 1. 자궁 세포 특이적 Dgcr8 cKO 생쥐의 자궁형태를 분석한다. 생후 0, 4, 8주 후 Dgcr8 cKO 생쥐의 자궁을 적출한다. 암컷 생쥐의 생식기관의 외형 관찰, H&E 염색을 통한 gross morphology 분석 등을 이용하여 자궁 구조를 분석한다. 2. Target microRNA 의 발굴 및 기능 이해 실험 2. 자궁에서 Dgcr8에 의해 생성 되어지는 microRNA를 발굴 한다. Dgcr8 cKO 생쥐들의 표현형을 비교 분석하여 microRNA array를 진행할 생쥐 모델과 시기를 결정한다. 자궁을 적출하여 total RNA를 얻는다. 실험상 오차를 최소한 하기 위하여 각 실험군별 3마리의 생쥐 자궁에서 추출한 RNA를 pooling 하여 array에 사용한다. 또한 각 실험군에 대해서 triplicate로 실험을 진행한다. Array 결과를 분석하여 자궁 발달 및 착상에 영향을 미치는 microRNA를 발굴하고 이들에 대한 primer 들을 제작 또는 구입하여 realtime RT-PCR로 검증한다. 실험 3. Dgcr8 cKO 자궁에서 발현 차이를 보이는 mRNA를 발굴한다. MicroRNA의 target 유전자들은 in silico 상에서 예측가능하나 in silico 분석에 의해 예상된 target 유전자들의 수가 너무 많아, 실제 target 유전자들을 확인하는데 어려움이 있다. 따라서 microRNA에 대한 target 유전자 분석을 위하여 mRNA array를 진행 하여 microRNA array에서 선별 된 target 유전자와 일치시켜 가능성이 높은 유전자들 선별한다. □ 연구개발결과의 중요성 본 연구는 서로 다른 Cre-생쥐모델 Amhr2-Cre와 Ltf-Cre을 이용하여 Dgcr8 cKO 동물모델을 확보하여 자궁의 cell-type specific한 microRNA 기능과 역할을 종합적으로 분석하는 최초의 연구이다. 서로 다른 Cre 생쥐 모델의 활용으로 Dgcr8 f/f ;PR-Cre 표현형을 세포 종류별로 세분화하여 microRNAs의 중요성을 이해 할 수 있다. 또한 임신 과정 동안에 microRNAs의 기능과 역할을 구체적으로 밝힐 수 있다. 본 연구에서 발굴된 자궁 세포 특이적 microRNAs를 이용하여 다양한 여성 질환들 (불임, 다낭성 난소 증후군, 자궁내막증, 자궁내막암 등)의 원인 규명 및 치료법 개발에 기여 할 수 있다. 자궁의 생리적 변화 조절에 미치는 영향을 종합적으로 분석 하기위해 자궁의 서로 다른 세포에서 조절되는 microRNA의 “real' target 유전자 밝혀내는 것은 쉽지 않다. 하지만 다양한 여성 질환에서 발견된 비정상적으로 조절되는 microRNAs들이 다양한 질환들의 진단 마커 (diagnostic marker)로써 활용 가능할 뿐만 아니라, 효과적인 microRNA-based gene therapy에 중요한 단서를 제공 할 수 있을 것이다. 따라서, 본 연구 결과는 세포 특이적인 micorRNAs의 기능을 밝히고 microRNAs들과 자궁의 기능 이상 및 다양한 자궁관련 질환들과 관련성을 이해하는데 중요한 정보를 제공 할 수 있다. (출처 : 연구결과 요약문 3p) |
