| 초록 |
본 발명은 대장균 숙주세포에서 재조합 발현으로 이쇄형의 폴리펩티드 또는 단백질을 제조하는 방법에 관한 것으로, 상기 방법에서 (i) 상기 폴리펩티드 또는 단백질은 이쇄 폴리펩티드 또는 단백질로서 그 생물학적 활성을 나타내고, (ii) 제1 사슬의 C-말단 아미노산 그룹은 Arg 또는 Lys 그룹이고, (iii) 상기 단백질 또는 폴리펩티드의 제2 사슬은 N-말단에 1 내지 20 아미노산 그룹 및 PRS로 지칭되는 펜타펩티드 서열 VPXGS을 가지며, 이때 X는 모든 자연 발생 아미노산일 수 있으며, V는 Val, Leu, Ile, Ala, Phe, Pro 또는 Gly이며, P는 Pro, Leu, Ile, Ala, Phe, Val 또는 Gly이며, G는 Gly, Leu, Ile, Ala, Pro, Phe 또는 Val이며, S는 Ser, Tyr, Trp, 또는 Thr이다; 및 (iv) 상기 방법은 (a) 폴리펩티드 또는 단백질이 그 루프 영역내에 VPXGS 서열(X, V, P, G, 및 S 는 상기에서 정의된 바와 동일하다)을 갖도록, 핵산 수준에서 폴리펩티드 또는 단백질을 변경하는 단계; (b) 상기 핵산 수준에서 변경된 구조체를 대장균 세포에 삽입하는 단계; (c) 숙주 세포를 배양하고 이후 용해시키는 단계; 및 (d) 이황화 가교된 이쇄 펩티드 또는 단백질을 분리하는 단계를 포함한다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 폴리펩티드 또는 단백질은 보툴리늄 신경 독소, 특히 보툴리늄 신경 독소 타입 A(BoNT(A))이다. |
