| 초록 |
본 발명은 천연재료인 쪽 식물에 포함되어 있는 인디칸(indican)에 작용하여 염료와 의약품 원료, 생리활성 물질로 이용되는 인디루빈(indirubin)의 생산 방법에 관한 것으로 베타-글루코시다아제(β-glucosidase)와 이사틴 생성 효소를 코딩하는 유전자를 포함하는 형질전환 미생물로 인디루빈를 특이적으로 대량 생산할 수 있는 방법을 제공하는 것이다. 더욱 상세하게는, 본 발명은 인디루빈의 제조 과정 중 인독실의 C-2 위치에 선택적으로 산화활성을 나타내는 옥시게나아제의 발굴 및 그 개량방법에 관한 것으로, 생물정보학적 방법으로 GenBank 에 등록된 서열에서 관련 유전자를 탐색/발굴한 후 발현벡터에 삽입해 형질전환시킨 재조합 균주를 ampicillin 과 인디칸이 포함된 LB 고체배지에 도말해 붉은색을 띄는 클론을 확보하는 과정을 거쳐 선발된 기능성 옥시게나아제 및 그 제조방법을 제공하는 것이다. 또한 발굴된 옥시게나아제의 활성증대를 위해 무작위 돌연변이법으로 제작된재조합 유전자를 글루코시다아제가 포함된 재조합 균주에 형질전환한 후 대조군에 비해 인디루빈 생성능이 증가된 유전자가 삽입된 클론을 확보하는 과정으로 개량된 유전자원을 이용하는 인디루빈 제조 방법을 제공하는 것이다. |
