| 초록 |
본원에는 정상적으로는 탄소원으로서 갈락토스를 사용할 수 없지만 단독 탄소원으로서 갈락토스를 사용하도록 본원의 방법에 따라서 유전적으로 공학처리시킨 저급 진핵 세포, 예컨대 피키아 파스토리스 ( Pichia pastoris )가 기재되어 있다.상기 세포는 를루아르 (Leloir) 경로를 포함한 몇 가지 효소를 발현하도록 유전적으로 공학처리시킨다.특히, 상기 세포는 갈락토키나제, UDP-갈락토스-C4-에피머라제 및 갈락토스-1-포스페이트 우리딜트랜스퍼라제, 및 임의로 갈락토스 퍼미아제 (permease)를 발현하도록 유전적으로 공학처리시킨다.또한, 상기 세포를 갈락토키나제, UDP-갈락토스-C4-에피머라제 및 갈락토스-1-포스페이트 우리딜트랜스퍼라제를 암호화하는 하나 이상의 핵산 분자로 형질전환시키는 단계를 포함하는, 갈락토스 잔기를 갖는 N -글리칸을 수반한 당단백질을 생성하도록 유전적으로 공학처리시켰지만 정상적으로는 를루아르 경로를 포함하는 효소들이 결여된 세포에서 갈락토스-말단화 또는 갈락토스-함유 N -글리칸을 갖는 당단백질의 수율을 개선시키는 방법이 제공된다.본원에 기재된 방법 및 숙주 세포는 재조합 세포를 만들기 위한 선별 방법으로서 갈락토스를 동화시킬 수 있는 능력이 존재하게 하거나 결여되게 할 수 있다.이러한 방법 및 숙주 세포가 갈락토스-말단화 또는 갈락토스-함유 N -글리칸을 갖는 면역글로불린 등을 제조하는 데에 특히 유용한 것으로 본원에서 밝혀졌다. |
