| 초록 |
대장균( Escherichia coli; E.coli )에서 재조합 단백질의 대량 생산에서 생물학적으로 활성이 전혀 없는 봉입체(inclusion bodies)라 불리는 불용성 응집물이 형성된다. 따라서 현재에 이르기까지 이러한 불활성 봉입체로부터 재조합 단백질을 효과적으로 추출 및 정제하기 위하여 많은 연구들이 진행되었으나, 이러한 방법들은 종종 재조합 단백질의 생물학적 활성을 저해한다. 이에 본 발명에서는 단백질 생산 , 추출 및 정제 방법을 최적화하여 불용성 봉입체 형성을 최소화하고 재조합 단백질, 특히 인간성장호르몬의 용해도를 극대화하여 높은 수준의 순도와 수득율을 갖는 재조합 단백질의 세포 내 생산 방법을 제공한다. 더욱이 본 발명에서 제공하는 단백질 생산, 추출 및 정제 방법이 재조합 단백질 특히, 인간성장호르몬의 생물학적 활성의 저해가 전혀 없다는 것이 특징이다. 단백질 정제는 통상의 크로마토그래피법을 이용하되 태깅이 없는 인간성장호르몬의 경우, 2 종류의 음이온 크로마토그래피 방법을 연속적으로 적용하여 효과적으로 정제하였다. 본 발명의 단백질 발현, 추출 및 정제 방법으로 획득한 인간성장호르몬은 다양한 분석기술(역상 고성능 액체크로마토그래피(Reverse Phase-High Performance Liquid Chromatography), 크기배제 크로마토그래피(Size Exclusion Chromatography), 고분해능 매트릭스 보조 레이저 탈착 비행시간 질량분석기(Matrix-assisted Laser Desorption Ionization- Time of Flight Of Flight Mass Spectrometry, MADI-TOF), 원편광이 색법(circular dichroism)을 통해 구조, 순도, 크기 및 활성이 모두 분석되었다. 상기 다양한 분석들로부터 상기 인간성장호르몬의 2차 구조와 분자량을 확인하였으며, 고순도로 획득된 인간성장호르몬은 농도에 의존적으로 세포 증식을 촉진시키는 것이 확인되었다. 따라서 본 발명의 발현, 추출 및 정제 방법은 불용성 봉입체 형성을 최소화하면서 단백질 용해도를 극대화하는 하는 동시에 생물학적 활성에는 영향이 없는 조건에서 재조합 인간성장호르몬을 순수 분리하는 것이 특징이다. |
