| 초록 |
Wistar계 흰 쥐의 뇌 시토졸의 aldehyde reductase(ALR)들을 황산 암모늄 분별 침전, DEAE-Sepharose CL-6B ion exchange chromatography, Blue-Sepharose CL-6B affinity chromatography, hydroxylapatite chromatography를 이용하여 분리 정제하였다. 그 중 p-nitrobenzaldehyde에 대한 $K_m$ 값이 낮은 것( $45 ;{ mu}M$ )을 low $K_m$ ALR, 큰 것( $160 ;{ mu}M$ )을 high $K_m$ ALR이라고 하였다. 이 두 isozyme은 모두 SDS-PAGE 상에서 단일 띠로 나타났으며 Sephacryl S-200 gel filtration을 수행한 결과 분자량이 각각 72,000dalton과 42,000dalton이었다. 이 효소들의 최적 촉매 pH는 high $K_m$ ALR이 6.5, low $K_m$ ALR이 6.0이었고 두 isozyme은 $37^{ circ}C$ 에서는 상당히 안정하며 $50^{ circ}C$ , $70^{ circ}C$ 로 온도가 높아질수록 짧은 시간 내에 활성이 급격히 상실되었으나 low $K_m$ ALR은 high $K_m$ ALR에 비해 좀 더 안정하였다. 몇 가지 기질에 대한 low $K_m$ ALR과 high $K_m$ ALR의 $K_m$ 값을 조사한 결과 대부분의 aldehyde에 대해 low $K_m$ ALR이 high $K_m$ ALR 보다 낮은 $K_m$ 값을 가지는 것으로 나타났으나, succinic semialdehyde에 대하여는 유달리 high $K_m$ ALR의 $K_m$ 값이 낮았다. $V_{max}/K_m$ 을 친화력의 척도로 사용하였을 때 두 ALR isozyme이 모두 aliphatic aldehyde 보다는 aromatic aldehyde에 대한 결합력이 컸다. High $K_m$ ALR은 succinic semialdehyde에 대한 결합력이 크고 $K_m$ 값이 낮아서 $ gamma$ -hydroxybutyrate 대사와 밀접한 관련이 있으며, low $K_m$ ALR은 biogenic aldehyde의 대사에서 중요한 역할을 하는 것으로 생각된다. |
