| 초록 |
본 연구의 장기적 목표로, 미토콘드리아 막에 aldehyde dehydrogenase(ALDH)가 존재하는가? 그리고 존재한다면 어떤 구조와 기능을 갖는가? 를 알기 위하여 우선 쥐 간 미토콘드리아를 sucrose의 step gradient(1~2 M) 원심분리를 이용하여 순수분리하였고, 초음파로 파쇄한 후 초원심분리를 이용하여 순수한 미토콘드리아 막 분획을 얻었다. 미토콘드리아 막 분획에 ALDH가 존재하는가를 ALDH 활성 측정으로 확인하였다. 미토콘드리아 막 ALDH를 용해시키기 위하여 여러 가지 종류(Triton X-100, digitonin, Lubrol PX, cholate 그리고 Chaps)의 detergent를 여러 가지 농도(0.5%, 0.75%, 1%, 1.5% 그리고 2%)로 사용하여 조사한 결과 1% cholate가 가장 좋은 용해 조건이었으며, 또한 용해를 위한 최적의 염(NaCl) 농도와 pH 조건은 각각 1M과 9.0이었다. 또한 용해시 5 mg/ml phospholipid 첨가가 막 ALDH 활성을 증가시키는 안정제 역할을 하였다. 5 mg/ml phospholipid와 1% cholate를 함유한 sucrose의 linear gradient(3~10%) 원심분리를 이용하여 부분정제를 한 결과 처음보다 약 100배 정제된 것을 알수 있었고, 이 부분정제된 cholate-solubilized ALDH로부터 투석을 이용하여 cholate를 제거하여 proteoliposome을 만들어 활성을 측정한 결과 그 전보다 2배 이상 증가하였다. |
