| 초록 |
PCR로 증폭한 슈도모나스균(Pseudomonas sp.) WBC-3의 메틸파라티온 가수분해효소(methyl parathion hydrolase) 유전자를 표면 전시(surface display) 플라스미드 pYD1의 다클론 위치에 삽입하여 pYD1-MPH 재조합 플라스미드를 구축하였다. 구축한 재조합 플라스미드로 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) EBY100을 형질전환시킨 후 2% 갈락토스(galactose)로 메틸파라티온 가수분해효소를 유도 발현하였으며, 또한 면역 형광 검사로 메틸파라티온 가수분해효소가 사카로마이세스 세레비지애 세포 표면에서 발현 전시 현황을 검사하였다. 그리고 표면 전시된 메틸파라티온 가수분해효소의 효소학적 성질과 효모 공정균(engineered strain)이 수체(water) 중의 메틸파라티온에 대한 분해 효과를 연구하였다. 연구 결과, 모든 세포의 메틸파라티온 가수분해효소에 대하여 촉매 활성(catalytic activity)이 있는 효모 공정균이 성공적으로 구축되었고, 2%의 갈락토스로 48시간 유도하였을 때 표면에 전시된 메틸파라티온 가수분해효소의 비활성(specific activity)이 18.2 U/mg 세포 건조무게(dry cell weight)에 도달하였다. 표면에 전시된 메틸파라티온 가수분해효소의 가장 적합한 작용 pH가 9.5, 가장 적합한 작용 온도가 30℃였고, pH 4.0~10.5사이와 45℃ 이하에서 안정성이 비교적 좋았으며, Mn 2+ , Co 2+ , Zn 2+ , Ca 2+ , Hg 2+ , K + , Ni 2+ 이 표면에 전시된 메틸파라티온 가수분해효소 활성에 대하여 활성화 작용이 있었고, Na + , Fe 3+ , Ag + 이 전시된 효소의 활성에 대하여 억제 작용이 있었다. 공정균은 1 시간 내에 담수(freshwater) 중의 농도가 20 mg/L인 메틸파라티온에 대한 분해율이 80% 이상이었다. |
