| 저자(한글) |
LIU, Li,LI, Yue-ting,ZHANG, Meng-meng,YANG, Yu-tao,XU, Zhi-qing |
| 초록 |
본 논문은 Pokemon 유전자의 아연 집게 도메인(Zinc finger domain)을 원핵 발현(prokaryotic expression)하였고, GST-아연 집게 융합 단백질을 정제(purification)하여 획득하였다. 그리고 인간 신경교종(glioma) T98G 세포의 cDNA을 템플릿으로 하고, PCR 방법으로 BamHI와 SalI 효소 절단(enzyme digestion) 위치를 함유한 인간 Pokemon 유전자의 아연 집게 도메인을 증폭한 다음 pGEX-4T-1 원핵 발현 벡터에 클론하였다. 재조합 벡터를 대장균 BL21(DE3)에 전환한 후 IPTG로 유도 발현하였다. 그리고 MagneGST particles를 이용하여 아연 집게 융합 단백질을 친화성 정제(affinity purification)하였으며, 마지막으로 웨스턴 블롯(Western blot)으로 해당 융합 단백질을 검정하였다. 연구 결과, pGEX-4T-1-아연 집게 원핵 발현 벡터가 성공적으로 구축되었다. 30℃ 조건에서 0.2 mmol/L의 IPTG로 대량의 가용성GST-아연 집게 단백질을 유도할 수 있었으며, MagneGST particles로 정제한 GST-아연 집게 단백질은 Pokemon 아연 집게 도메인의 항체에 의하여 특이적으로 식별될 수 있었다. 정제한 GST-아연 집게 단백질을 후속 생물학적 연구에 이용할 수 있다. |
