| 저자(한글) |
ZHENG, Juan,GUO, Huai-zu,LI, Jing,DUAN, Shu-yan,ZHAO, Zi-ye,ZHANG, Da-peng,GUO, Shang-jing,WANG, Hao |
| 초록 |
재조합 엔도프로테이나제 AspN(recombinant endoproteinase AspN)는 아연 금속 엔도펩티다아제(zinc metalloendopeptidase)이고, 선택적으로 아스파르트산(aspartic acid)의 N 말단 펩타이드 결합(peptide bonds)을 절단할 수 있으므로 단백질의 폴리펩타이드 제조 및 펩타이드의 질량 스펙트럼 검정에 광범위하게 응용되고 있다. 현재 엔도프로테이나제 AspN는 세균의 분비에서 유래하므로 생산량이 낮고, 제조하기 어려우며, 원가가 높다. 그러므로 해당 효소의 응용을 아주 크게 제한하고 있다. Elizabethkingia meningoseptica가 분비하는 단백질 엔도프로테이나제 AspN과 대응되는 유전자를 발현 벡터 pET32a에 클론한 후 대장균 BL21(E. coli BL21, DE3)에 주입하여 처음으로 원핵 발현 시스템을 이용하여 가용성 융합 발현을 진행하였고, 친화성 크로마토그래피(affinity chromatography)로 재조합 단백질을 정제(purification)하였다. HPLC, SDS-PAGE 및 형광 기질(fluorogenic substrate) Anthranilyl-Ala-Phe-Ala-Phe-Asp-Val-Phe(NO2)-Tyr-Asp로 재조합 효소의 효소 활성을 검정하였다. 연구 결과, 재조합 엔도프로테이나제 AspN는 표준 효소와 거의 일치한 효소 절단 활성이 있었고, 생물 및 제약 분야의 응용에 비교적 적합하였다. |
