| 저자(한글) |
WEI, Chuan-jie,XIAO, Shuang,JIANG, Lan,TAN, Yan,HUANG, Bo,LONG, Ding-xin |
| 초록 |
pGenesil-1-Beclin1 진핵 발현 벡터와 Beclin1 안정한 침묵적인 인간 신경아세포종(Human Neuroblastoma) SH-SY5Y 세포주를 구축하기 위하여, 합성한 shRNA 조각을 pGenesil-1 플라스미드에 연결시켜, 재조합 플라스미드 pGenesil-1-Beclin1로 구축하였다. 이를 수용상태 대장균 JM109에 전환시키고 양성 클론을 선택하여 이중효소 접합과 DNA 시퀀싱 감정을 진행하였다. 일반 배양법으로 SH-SY5Y 세포를 배양하였다. 재조합 플라스미드 pGenesil-1-Beclin1과 대조군 플라스미드 pGenesil-1을 SH-SY5Y 세포에 형질감염시켰으며, G418 저항성에 의해 선별되었고, 형광 현미경 조건에서 단일세포 클론을 선택하여 안정 세포주로 될 때까지 확대배양하였으며, RT-PCR과 Western blot을 거쳐 Beclin1 유전자의 발현을 검출하였다. 효소접합과 DNA 시퀀싱 감정 결과, 재조합 진핵 발현 벡터를 정확하게 구축하였으며, 2주의 세포주를 성공적으로 선별하였다. 대조군의 pGenesil-1을 형질감염시킨 세포주와 비교할 때, pGenesil-1-Beclin1을 형질감염시킨 세포주의 Beclin1 mRNA 발현은 71.28%±1.45%(P pGenesil-1-Beclin1 진핵 발현 벡터와 Beclin1 유전자 안정 침묵의 SH-SY5Y 세포주의 성공적인 구축은 Beclin1 기능을 연구하는데 세포 모델을 제공하였다. |
