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논문 기본정보
Expression of Tat-MANF Fusion Protein and Its Bioactivity Analysis
논문 개요
| 기관명 | NDSL |
|---|---|
| 저널명 | 中國生物工程雜誌 = Journal of Chinese biotechnology |
| ISSN | 1671-8135, |
| ISBN |
논문저자 및 소속기관 정보
| 저자(한글) | LI, Chen,GU, Hua,GUO, Jia,SUN, Hui,HUANG, Jing-wei,JIANG, Ming,JIN, Ling-jing,FANG, Jian-min |
|---|---|
| 저자(영문) | |
| 소속기관 | |
| 소속기관(영문) | |
| 출판인 | |
| 간행물 번호 | |
| 발행연도 | 2014-01-01 |
| 초록 | 목적 : Tat 서열을 함유한 신형 신경영양인자 MANF(중뇌 성상교세포 신경영양인자, mesencephalic astrocyte-derived neurotrophic factor) 융합 단백질(Tat-MANF)을 발현하는 재조합 플라스미드를 구축하고 원핵 세포 발현 시스템을 이용하여 본 재조합 단백질을 발현시키며 생물학적 활성을 검사한다. 기법 : MANF cDNA를 탬플릿으로 하고 PCR 기술을 사용하여 상위 및 하위에 TAT 서열, His 마커, 적합한 제한적 효소 소화 위치를 각각 첨가하고 TAT-MANF 융합 유전자를 구축한다. 발현 벡터 Pet22b + 를 도입하여 대장균 BL21을 형질전환한 다음 발현 및 정제한다. SDS-PAGE 및 Western blot 분석을 사용하여 재조합 단백질의 발현을 검사한다. Tat-MANF의 생물학적 활성을 검사하기 위해 30μmol/L 농도의 6-히드록시도파민(6-Hydroxydopamine, 6-OHDA)을 이용하여 신경모아교종세포(SH-SY5Y)에 독성을 유도한다. 이와 동시에 2μg/ml의 TAT-MANF 및 대조 MANF 단백질을 첨가하고 24시간 후 유세포 분석기를 사용하여 세포의 사멸율을 검사한다. 뇌 미세혈관 내피세포(B-endo3) 체외 혈액-뇌장벽(blood-brain barrier) 모델을 사용하고 FITC로 마킹한 Tat-MANF와 4시간 공동 배양한 다음 형광현미경 아래에서 관측한다. 결과 : TAT-MANF 융합 유전자를 성공적으로 구축하였다. 발현 생성물과 목표 단백질의 크기는 일치하였고 MANF 항체와 결합하였다. 재조합 단백질은 6-OHDA에 의해 유도되는 SH-SY5Y 세포 사멸을 감소하였다. Tat-MANF-FITC와 B-end3 세포를 4시간 공동 배양한 후 세포 내에서 형광하는 것을 관측할 수 있었다. 결론 : 획득한 재조합 단백질 Tat-MANF는 신경세포 보호작용이 있었고 막관통 기능이 있었다. 본 연구는 파킨슨병의 체내 치료 연구에 물질적 기초를 마련하였다. |
| 원문URL | http://click.ndsl.kr/servlet/OpenAPIDetailView?keyValue=03553784&target=NART&cn=NART71005673 |
| 첨부파일 |
추가정보
| 과학기술표준분류 | |
|---|---|
| ICT 기술분류 | |
| DDC 분류 | |
| 주제어 (키워드) | Mesencephalic astrocyte-derived neurotrophic factor,Parkinson's disease transmembrane,protein,Fusion protein,중뇌 성상교세포 신경영양인자,파킨슨병,막관통 단백질,융합 단백질 |