| 저자(한글) |
ZHANG, Yin-chuan,LIU, Meng-meng,ZHANG, Ya-ting,GUI, Fang,ZHANG, Ai-hua,BI, Lan,PAN, Yong-bing |
| 저자(영문) |
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| 소속기관 |
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| 소속기관(영문) |
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| 출판인 |
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| 간행물 번호 |
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| 발행연도 |
2015-01-01 |
| 초록 |
목적: 완전 인간형(Fully human)의 항인간 IgE 단클론항체를 발현하는 재조합 공학세포 균주에 대한 구축과 선별 과정을 수행한다. 기법: 리포솜 디스플레이 기술을 사용하여 선별한 완전 인간형의 항인간 IgE 단일 사슬 항체(scFv)에 대한 유전자 구조 개조를 통하여 IgG1κ형 전구간 항체를 설계한다. 재조합 진핵발현의 플라스미드를 구축하고 전기충격으로 CHO-S 세포를 형질전환한다. Dot-blot 기법으로 과발현 글론을 몇개 선택하여 40 ml 진탕 플라스크에서 유가식 배양 과정을 수행한다. 그리고 세포의 생장 특징과 항체 발현량에 근거하여 과발현 클론을 선택하고, 40 ml 진탕 플라스크와 3 L 진탕 플라스크로 유가식 배양을 연구한다. 후보 세포주를 선택하여 개조전과 후 항체의 생물학 활성을 비교 연구한다. 결과: pMH3-H, pMH3-L, pCApuro-H, pCApuro-L 4종 재조합 진핵발현 플라스미드의 구축에 성공했으며, CHO-S 세포의 공동 형질전환에 성공했다. 4차례의 전기충격 형질전환과 8차례의 세포 클론에 대한 선별을 통하여 2주의 발현량이 비교적 높은 후보 클론 Mab와 Mab를 얻는다. 3 L 진탕 플라스트에서 수행한 유가식 배양 결과, 발현량이 각각 470 mg/L 및 499 mg/L에 달했다. 생물막 광간섭기술(Bio-Layer Interferometry, BLI)의 친화도 검사 결과, Mab 1# 및 Mab 2# 2주의 단클론항체의 친화도가 모두 nmol/L 급(10 -9 )에 도달했다. 이는 현재 시장 출시의 유일한 항인간 IgE 항체 약물인 오말리주맙(Omalizumab)의 친화도와 비슷하다. Mab1# 전구간 항체와 개조전의 모체 단사슬 항체를 선택하여 표면 플라즈마 공진기술(surface plasmon resonance, SPR)로 중화 활성을 비교한 결과, hIgE와 FcεRI 결합을 억제하는 Mab 1# 의 중화 활성 EC50이 3 nmol/L이고 EC90이 9 nmol/L로써, 개조 전의 친화도보다 4.3배 향상하였다. 즉 EC50이 23.7배 향상하고 EC90이 41.3배 향상하였다. 결론: 완전 인간형 항인간 IgE의 단사슬 항체(약 25kDa)를 친화도와 중화 활성이 모두 대폭 향상된 전구간 항체(약 150kDa)로 개조하여 2개의 후보 세포주를 얻었다. |
| 원문URL |
http://click.ndsl.kr/servlet/OpenAPIDetailView?keyValue=03553784&target=NART&cn=NART75844981 |
| 첨부파일 |
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