| 저자(한글) |
SANG, Ming,DAI, Ming,ZHOU, Li,LIU, Jin-biao,GUO, Ming,MA, Tong-cui,XIAO, Qian-hao,HUO, Wen-zhe |
| 초록 |
목적: 간단하고 경제적이며 고효율적인 붉은털원숭이의 말초 혈액 단핵 대식세포(monocyte-derived macrophages, MDM) 배양 방법을 구축하였다. 기법: 헤파린나트륨 항응고 튜브를 사용하여 다 자란 붉은털원숭이(Macaca mulatta)의 전혈(whole blood)을 채집하고 밀도기울기 원심분리법을 사용하여 말초 혈액 단핵세포(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)를 분리한다. 이와 동시에 항응고제를 사용하지 않은 채혈 튜브를 사용하여 동일 원숭이의 말초 혈액을 채집하고 자연 응고 후, 혈청을 분리한다. 원숭이 PBMCs를 CellBIND Surface의 96홀(0.8×10 6 개 세포/홀) 또는 48홀(3×10 6 개 세포/홀) 배양판에 접종한 다음 백분율이 서로 다른 원숭이 자가 혈청 또는 우태 혈청(fetal calf serum, FCS)을 함유한 RPMI 1640 배양액에서 24시간 배양한 후 미부착(non-adherent) 세포를 제거한다. 그 다음 원숭이 자가 혈청 또는 FCS를 함유한 배양액을 주입하여 7일 연속 배양한 후 세포 형태를 관찰한다. 잘 분화된 원숭이 단핵 대식세포의 부착력은 강하였고 배양판 밑부분의 대부분 면적을 차지하였다. 세포 형태는 다양하고 대부분은 길쭉한 방추형이었다. 대식세포를 사용하여 수용체(CD14)를 표기한 후 항체 염색법을 사용하여 세포의 순도를 판단한다. 또한 세균 내 독소인 지질다당류(LPS)를 사용하여 분화된 대식세포를 자극한 후 대식세포 염증성 인자의 발현을 검사한다. 이 외, 원숭이 에이즈 바이러스(SIVmac17E-Br, SIVmac251)와 인간-원숭이 키메라(chimera) 에이즈 바이러스(SHIV KU-1)를 사용하여 잘 분화된 원숭이 대식세포를 감염시킨다. 그 다음 원숭이 대식세포에서 바이러스의 복제를 검사한다. 결과: 원숭이 자가 혈청을 2% 함유한 RPMI 1640 배양 환경에서 대부분( gt;85%)의 원숭이 단핵세포는 24시간 안에 부착하였고 체외에서 5~7일 분화 후 원숭이 대식세포의 순도는 96% 보다 높았다. 이에 비해, 농도가 높은(4%, 8%, 10%) 원숭이 자가 혈청을 함유하였거나 FCS를 함유한 RPMI 1640 배양액에서 원숭이 단핵세포의 부착, 분화 작용은 못했다. 잘 분화한 원숭이 대식세포는 LPS 자극에 민감하였고 여러 가지 대식세포 염증성 인자를 발생하였다. 이 외, 이러한 세포는 SIV 또는 SHIV에 민감하였고 감염성 바이러스를 발생하였다. 결론: 원숭이 자가 혈청을 2% 함유한 RPMI 1640 배양액은 초대 원숭이 단핵세포의 부착, 분화에 적합하였다. 본 방법은 간단하고 비용이 적게 들고 성장인자를 필요로 하지 않으며 분화 효과가 좋은 장점이 있어 원숭이 에이즈 바이러스 배양 및 관련 면역학 실험의 중요 수단이다. |
