| 저자(한글) |
LI, Jing-chuan,XUE, Bo-fu,YUAN, Yuan,MA, Mo,ZHU, Lin,Milburn, Rebecca,LI, Le,HU, Pei-zhen,YE, Jing |
| 초록 |
β-NGF의 대량 구축을 위해, 재조합된 인간의 신경 생장 인자(Recombinant human nerve growth factor, rh-β-NGF)를 안정적이고 고효율적으로 발현할 수 있는 진핵 발현 벡터와 해당 재조합 벡터를 함유한 HEK293 세포주를 구축하였다. 먼저, 재조합 플라스미드 pCMV-β-NGF-IRES-dhfr를 구축하여 HEK293 세포계에 형질전환하였다. MTX 가압 여과기(Pressure filter)와 한계 희석법(limiting dilution assay)을 이용한 선택을 통하여, rh-β-NGF를 효율적으로 발현할 수 있는 단일 클론 재조합 세포주를 얻었다; 그리고 혈청 배양의 혈청 농도를 점차 낮추었다. 결국, 세포주는 혈청이 없는 배양기에 완전히 적응하였으며 rh-β-NGF를 안정적으로 발현할 수 있게 되었다; SDS-PAGE 기법으로 해당 발현 산물을 분석한 결과, 밴드의 상대적인 분자 질량이 약 13 kDa이고 순도가 50% 이상이었다. 질량 스펙트럽 기법에 의해 얻어진 해당 펩티드 스펙트럼과 이론 서열이 완전하게 일치했다. 계속하여 이온교환 크로마토그래피와 분자선별 크로마토그래피로 rh-β-NGF를 정제하였다; 마지막으로 재조합 세포주의 발현 효율과 발현 안정성을 검사하였다. 재조합 세포주는 rh-β-NGF를 안정적이고 고효율적으로 발현할 수 있었는데, 그 분비 효율이 20 pg/(cell?d) 이상이었으며 PC12 세포의 분화를 유도할 수 있다. 즉 양호한 생물학 활성이 있다. |
