| 초록 |
기회 감염성 녹농균(opportunistic Pseudomonas aeruginosa)은 세균의 생물막을 연구하는 모델 균주이다. 해당 세균이 분비하는 세포외 다당(extracellular polysaccharide) Psl는 생체막 형성 과정에서 중요한 작용을 한다. PslD는 Psl 다당의 운반 단백질이고, 256개 아미산으로 구성되었다. 생물정보학적 분석 결과, PslD의 N 말단에는 신호 펩타이드가 있고 또한 1차원 막관통 단백질(one transmembrane protein)인 것으로 나타났다. 완전한 막관통 단백질을 분리 및 정제하는 과정에는 청정제(detergent)의 작용이 필요하다. 그러나 청정제의 종류는 많고 성질이 서로 다르다. 그러므로 본 연구는 PslD를 용해하는 청정제를 선별하는 방안을 설계하였다. 히스티딘 저항성 표지 웨스턴 블롯(anti-histidine labeled western blot analysis) 분석 결과, n-데실-β-D-말토피라노시드(n-Decyl-β-D-maltopyranoside, DM), n-데실-N,N-다메틸아민-N-옥시드(n-Decyl-N,N-dimethylamine-N-oxide, DDAO) 및 n-도데실-N,N-다메틸아민-N-옥시드(n-Dodecyl-N,N-dimethylamine-N-oxide, LDAO)가 PslD에 대한 용해 효과가 비교적 높았다. 총단백질(total protein)과 청정제 비율을 변화시키는 것을 통하여 청정제의 용해 조건을 한층 더 최적화 하였는데 해당 최적화 조건은 8mg/mL 총단백질:질량 분율이 1%인 LDAO였다. 최적화 용해 조건에서 오직 1단계의 니켈 컬럼 친화성 크로마토그래피(Ni column affinity chromatography)를 통하여 정제한 표적 단백질의 순도(purification)는 80% 이상에 도달하였다. 이것은 심층적인 단백질 결정화 및 해당 구조에 대한 생물학적 연구에 기초를 마련하였다. |
