| 초록 |
말론산을 유일한 탄소원으로 이용하여 자란 Pseudomonas fluorescens에서 말산 생성효소가 유도되었다. 이 미생물로부터 황산암모니움 분별침전, DEAE-Sephacel 이온교환, 타트론산 Sepharose 4B, hydroxyapatite 크로마로그래피를 통하여 이 효소를 정제하였다. 정제된 효소는 단일 소단위로 되어있으며 분자량은 79,000 달톤이었다. 최적 pH는 8.5였고, pI는 4.6이었다. 아세칠 CoA에 대한 Km과 $V_{max}$ 는 각각 $17.5 ;{ mu}M$ 과 $21 ;{ mu}moles/min/mg$ 이었고 글리옥실산에 대하여는 각각 $7.7 ;{ mu}$ 과 $35.7 ;{ mu}moles/min/mg$ 이었다. 옥살산과 글리콜산은 경쟁적으로 효소활성을 방해하였고 이에 대한 Ki는 각각 $25 ;{ mu}M$ 과 $16.8 ;{ mu}M$ 이었다. 대사중간물인 시트르산, 이소시트르산과 숙신산에 의해서도 효소활성이 방해되었다. 또 요드아세트아미드, 클로로머큐리페닐설폰산이 강력하게 효소활성을 억제하는 것으로 보아 활성자리나 그 근처에 -SH기가 존재할 것이라고 예상된다. 정제된 효소는 토끼에 항체를 형성하게 하였고 이 항체와 정제된 효소사이에 단일띠를 보여주는 침전반응을 하였다. |
