| 저자(한글) |
LI, Yu-chen,WEN, Yi-ming,TONG, Ji-yu,XIANG, Jun-jian |
| 저자(영문) |
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| 소속기관 |
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| 소속기관(영문) |
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| 출판인 |
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| 간행물 번호 |
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| 발행연도 |
2013-01-01 |
| 초록 |
본 연구에서는 재조합 유전자를 구축하고 장염비블리오(Vibrio parahaemolyticus)의 외막 단백질 ompK 클론하여 다클론 항체를 제조하였으며 또한 장염비블리오의 면역자석 입자(Immunomagnetic beads) 농축 기술과 정색반응 검출법을 결합하여 이 다중 클론 항체를 분석하였다. 실험은 우선 생물 소프트웨어 Primer 5를 기반으로 장염비블리오 유전자의 프라이머를 설계하였고 PCR법을 이용하여 ompK 유전자를 증폭시켰으며 또한 이를 pET28a(+) 원핵 발현 벡터에 복제하여 대장균 BL21에 형질전환함으로써 발현을 최적화하였다. 그리고 Ni-세파로오스로 발현 산물을 정제하여 생쥐에 면역시킴으로써 최종적으로 다중 클론 항체를 확보하였다. Western blot로 재조합 단백질을 감정하였으며, ELISA로 그 면역 원성을 분석하였다. 간접 ELISA로 다중 클론 항체의 역가 및 교차성를 측정하였으며 또한 이를 protein G 자석입자 농축 기술 및 정색반응과 결합하여 장염비블리오를 검출하였다. 그 결과, ompK 단백질은 성공적으로 발현시켰다. 이를 생쥐에 면역시켜 특이적 항혈청을 확보하였으며 그 역가는 1?64000에 달하였다. Western blotting에 기반하여, 이 항혈청은 장염비블리오 28kD 내에서 특이적 결합을 유도할 수 있다는 것을 증명하였다. 그외, 제조한 면역 자석입자의 민감도는 최고로 10 4 CFU/mL에 도달할 수 있었다. 결론적으로, 장염비블리오의 외막 단백질 ompK를 클론하여 장염비블리오의 특이적 다중 클론 항체를 성공적으로 제조하였으며 또한 제안한 검출법은 기존의 2차 농축법에 비해 72시간이나 절약할 수 있었으며 그 전반 과정에 필요한 시간은 기존 방법의 1/3 정도 이었다. 그리고 일반 면역학적 검출법에 비해 민감도는 2개 수량급(two magnitudes)이 개선되었다. |
| 원문URL |
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| 첨부파일 |
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