| 초록 |
토양 진균 분자 생태학을 연구하려면 진균의 DNA를 대량 및 효과적으로 추출해야 한다. 시장 판매중인 일반 키트를 이용하여 토양 곤충기생 진균(entomopathogenic fungi) DNA를 추출할 때, 흔히 득율과 질량이 낮은 문제점이 존재하며 심지어 토양 진균의 DNA 샘플을 추출하지 못한다. 이러한 문제점에 초첨을 맞추어, 본 연구는 세포 파쇄 방법 및 후속 DNA 추출 파라미터에 대해 개선하고 최적화하였으며 겨냥성이 있는 추출 방법을 구축하였다. 해당 추출법이 곤충기생 진균-윤생곁가지포자균(Verticillium lecanii) 순수 배양물질에 대한 민감도는 매우 높았으며, 10개 포자 조건에서 DNA를 추출할 수 있고, 시장에서 판매하고 있는 키트로 추출할 수 없었다(10 7 개 포자 조건에서도 키트로 DNA를 추출하지 못하였다). 해당 추출법이 인공적으로 균을 투여한 토양 샘플의 DNA 추출에 대한 민감도는 10 2 개 포자/g 토양에 달하였으며, 얻은 DNA 순도는 높았고 뚜렷한 후속 PCR 증폭 물질을 뚜렷하게 억제하는 현상이 없었다. 윤생곁가지포자균을 시용한 논밭 토양 샘플에서 얻은 DNA 샘플로부터 윤생곁가지포자균 특이 조각을 성공적으로 증폭할 수 있으며, 윤생곁가지포자균을 시용하지 않은 논밭 샘플에서 얻은 DNA 샘플로부터 윤생곁가지포자균 특이 조각을 증폭할 수 없었다. 해당 추출 방법은 민감도와 순도가 높은 특징을 갖고 있으며, 토양 곤충기생 진균의 분자 생태학 샘플 제조에 적용된다. |
