| 저자(한글) |
CAI, Lin-lin,LIU, Cai-zhi,HUANG, Yong-mao,WANG, Sheng-nan,DUAN, Xiang-lin,FAN, Yu-mei |
| 초록 |
목적: 페리틴 경쇄(ferritin light chain, FTL)의 짧은 머리핀 소간섭 RNA(Hairclip small interfering RNA) 발현 벡터를 구축하여 FTL 기능을 한층 더 연구하는데 플랫폼을 제공하고자 한다. 방법: 생쥐 FTL 유전자의 위치적 특이성을 연구대상으로 하고, 그 특이성 길이가 약 65bp인 짧은 머리핀 모양의 소간섭 RNA(shRNA) 올리고핵산염(Oligonucleotide) 서열을 설계 및 합성하고, 가열 냉각하여 이중 사슬을 형성한 후, pRNA-U6.1/neo 진핵 발현 벡터의 제한 효소인 HindⅢ과 Bam HⅠ의 사이에 삽입하며, FTL유전자 간섭 벡터(FTL shRNA)를 구축한다. 시퀸싱 분석을 통해 그 정확성을 확인한 후, lipofectamine TM 2000을 이용하여, FTL shRNA 및 그 대조 그룹의 빈 벡터인 pRNA-U6.1/neo을 생쥐 복강 내 단핵 대식 세포(mononuclear macrophage)인 RAW264.7에 각각 형질주입(transfection)하고, 단백질 추출 후, 웨스턴 블럿(Western blot)기술을 이용하여, 해당 세포내 FTL 단백질의 발현을 검측한다. 결과: 희망하던 표적 조각과 크기가 유사한 재조합 벡터를 획득하였다. 시퀸싱 진행 결과, 본 논문에서 구축한 생쥐 FTL shRNA 플라스미드 서열이 정확한 것으로 밝혀졌다. FTL shRNA은 FTL의 세포 내에서의 발현을 간섭하는데 성공하였으며 그 효율은 80%로 높았다. 결론: 본 실험은 생쥐 FTL 유전자의 짧은 머리핀 모양의 소 RNA의 간섭 발현 벡터인 FTL shRNA를 성공적으로 구축하였다. |
