| 저자(한글) |
YU, Ying-peng,JIANG, Teng-fei,LI, Xi,MA, Xiao-rui,SONG, Ji-jun,LIU, Bo,QIAO, Dai-rong,CAO, Yi,XU, Hui |
| 초록 |
효소 활성이 높은 자일라나아제(Xylanases)는 공업에서 큰 응용 잠재력을 갖고 있으나 대부분 야생 자일라나아제는 공업 생산과정에서 고온과 같은 열악한 환경에 견딜 수 없다. 따라서 분자 생물학의 방법을 통하여 자일라나아제를 개조해야 한다. 본 논문에서는 분자 동역학 시뮬레이션과 위치지정 돌연변이의 방법을 통하여 Aspergillus niger(SCTCC400264)로부터 근원된 자일라나아제 XynB의 내열성을 향상시켰다. 위치지정 돌연변이 기술을 이용하여 돌연변이 벡터 pET32a- XynB-T79V를 얻고 대장균 Escherichia coli BL21(DE3)에 전환시켰으며, IPTG로 유도하여 자일라나아제 XynB-T79V를 성공적으로 발현시켰다. 니켈 친화성 크로마토그래피(Nickel affinity chromatography)로 단백질을 순화한 후 돌연변이 효소의 내열성을 측정하였다. 돌연변이체 XynB-T79V는 30, 40, 50℃에서 120분 처리한 후 효소 활성이 거의 손실되지 않았으며, 처리 온도가 60-80℃로 높아졌을 때 효소 활성이 감소하기 시작하였다. 온도가 80℃로 상승하였을 때 잔여 효소 활성은 여전히 37%이었으며, 이때 야생형 XynB는 거의 완전히 그 활성을 잃었다. 돌연변이체 XynB-T79V 반감기 t 1/2 는 8.7분 향상하였다. 본 연구에서 얻은 돌연변이 효소 XynB-T79V의 내열성은 뚜렷하게 향상되었으며, 공업 응용에 새로운 효소 자원을 제공하였다. |
