| 저자(한글) |
Shi, Xiaoming,Wu, Shengchun,Yang, Yongbin,Tang, Lei,Lv, Bonan |
| 초록 |
목적 : 작은 간섭 RNA(small interference RNA, siRNA) 침묵 아쿠아포린 5(aquaporin-5,AQP-5)의 발현이 인간 결장암(colon cancer) HT-29 세포에 대한 증식, 사멸(apoptosis) 및 화학약물에 대한 민감성에 미치는 영향을 연구하는 것이다. 방법 : 합성한 AQP-5-siRNA 서열로 HT-29세포를 형질전환(transfected into)시킨 후, 웨스턴 블로팅법(Western blotting)으로 AQP-5-siRNA의 형질전환 효율을 검사하고, 설포호다민(sulphorhodamine B, SRB) 염색법으로 각 그룹 중 세포의 증식억제율을 검사하였으며, 또한 유세포 분석법(flow cytometry, FCM)으로 HT-29 세포의 사멸현황을 검사하였다. 그리고 분광광도법(spectrophotometry)으로 HT-29세포 중 caspase-3의 활성을 검사하고, 실시간PCR(real-time PCR)과 웨스턴 블로팅법으로 AQP-5-siRNA가 형질전환된 후 HT-29 세포 중에서 PCNA와 P53이 mRNA과 단백질 수준으로 발현되는 현황을 검사하였다. 또한 5-플루오로우라실(5-fluorouracil)과 시스플라틴(cisplatin, DDP)으로 형질전환된 AQP-5-siRNA 세포를 자극하고, SRB 염색법으로 세포의 증식 억제율을 검사하였으며, 진전쥔법(Method of Jin Zhenjun)으로 5-플루오로우라실과 시스플라틴 두 가지 약물이 융합되어 작용할 때의 Q값을 계산하였다. 결과 : NC-HT-29 세포에 비하여 AQP-5-siRNA-HT-29 세포 중 AQP-5 단백질의 발현은 뚜렷하게 감소되었다(P lt;0.05). SRB 검사 결과, AQP-5-siRNA-HT-29 세포의 증식억제율은 뚜렷하게 증가된 것으로 나타났다[(9.23±0.51)%vs 0, P lt;0.05]. 유세포 분석법으로 검사한 결과, AQP-5-siRNA-HT-2 의 세포사멸율은 뚜렷하게 증가되었으며[(10.81±1.32)% vs (0.99±0.18)%, P lt;0.05], 카스파제-3(caspase-3)의 활성도 뚜렷하게 증가된 것으로 나타났다[(0.19±0.03) vs (0.09±0.01), P lt;0.05]. 실시간 PCR과 웨스턴 블로팅법으로 검사한 결과, AQP-5-siRNA-HT-29 세포 중에서 PCNA mRNA및 그 단백질의 발현은 뚜렷하게 감소되지만(P lt;0.05), P53 mRNA및 그 단백질의 발현은 뚜렷하게 증가되었다(P lt;0.05). AQP-5-siRNA+5-FU 그룹의 세포증식 억제율은 AQP-5-siRNA 그룹과 5-FU 그룹에 비하여 뚜렷하게 높았고[(44.93±2.28)% vs (9.11±0.32)%, (25.68±1.71)%, P lt;0.05], 또한 AQP-5-siRNA+DDP 그룹의 세포증식 억제율도 AQP-5-siRNA 그룹과 DDP 그룹에 비하여 뚜렷하게 높았다[(39.01±1.76)% vs (9.11±0.32)%, (18.47±1.25)%, P lt;0.05]. 그리고 AQP-5-siRNA과 5-FU 혹은 DDP를 병용한 후, Q값은 각각 1.38과 1.51인 것으로 나타났는데, 이는 AQP-5-siRNA과 5-FU 혹은 DDP의 병용이 협력작용을 한다는 것을 설명한다. 결론 : AQP-5-siRNA는 HT-29 세포의 증식을 억제하고, HT-29 세포의 사멸을 촉진하며, 또한 5-FU와 DDP 약물에 대한 HT-29 세포의 민감성을 향상시킨다. |
