| 저자(한글) |
MIAO, Zhang-lin,LUO, Wen,LIU, Shu-na,LV, Peng-mei,LI, Hui-wen,YANG, Ling-mei,YUAN, Zhen-hong,JIANG, Jian-chun |
| 초록 |
본 연구는 리조무코르 미에헤이(Rhizomucor miehei, RML)를 초기 균주로 하고, UNIQ-10 기둥형 Trizol 기반한 총 RNA 추출용 진단키트를 이용하여 이 균주의 총 RNA를 추출하였으며 역전사-폴리메라아제 연쇄 반응(RT-PCR)을 이용하여 리조무코르 미에헤이의 리파아제(RML) 구조 유전자를 증폭시켰다. 우선, 진핵 재조합 발현 플라스미드 RML-pPIC9K를 구축하였다. 다음으로, 전기충격법을 이용하여 이를 His + 결실형 파스퇴르 피치아 효모(Pichia pastoris) GS115에 형질전환시켰다. 마지막으로, MD-MM 평판 및 PCR 법을 기반으로 재조합체를 선별 및 감별하였고 메탄알콜로 유도 발현을 진행하였다. 그 결과, RML 유전자는 파스퇴르 피치아 효모 내에서 고효율로 발현시킬 수 있었다. SDS-PAGE법으로 재조합체의 발효액를 분석하여 예상 크기(약 39kD)와 일치한 특이 단백질 밴드가 확인되었으며 또한 NaOH 적정법으로 그 활성을 측정하였으며, 최대로 84U/mL에까지 도달할 수 있다는 것을 확인하였다. |
