| 저자(한글) |
YE, Lin-jie,HUANG, Qing-sheng,LI, Qi,ZHANG, Ming-jie,MA, Xu-dong,YANG, Hui,SHI, Jun-ling |
| 초록 |
목적: 새로 구축한 K562 유전자 재조합 세포에 IL-2 증폭을 결합하는 방안이 인간 자연살해세포(natural killer cell, NK 세포)의 증폭 및 활성화에 대한 효과를 평가하였다. 방법: 건강한 지원자와 종양 환자의 말초혈액 PBMC를 채집한 후 NK 세포를 분리하였으며, 또한 지난번 실험에서 구축한 K562 유전자 재조합 세포(IL-15, 4-1BBL 및 IL-18을 백혈병 K562 세포에 발현시켜 확보함)에 IL-2 배양을 결합하는 방안을 이용하여 NK 세포를 증폭시키고 활성화시켰다. 그리고 유세포 분석법을 통하여 NK 세포의 증폭 효과 및 NK 세포 표면의 수용체 발현 수준을 검사하였고 CCK-8법을 통하여 증폭한 후 NK 세포가 종양 세포에 대한 살해 활성 및 항체의존 세포매개 세포독성(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC) 활성을 검사하였으며, CCK-8법을 통하여 배양 방안의 증폭 말기에 TKD 폴리펩타이드의 첨가가 NK 세포에 대한 활성화 효과를 검사하였다. 결과: 건강한 지원자의 NK 세포에 대하여, 새로 구축한 증폭 배양 방안은 NK 세포가 PBMC 내에서 비율을 (93±3)%까지 향상시켰다. NK 세포 내 활성화 수용체 NKG2D, CD94, NKp30, NKp44 및 NKp46의 발현율은 각각 60%, 40%, 20%, 40% 및 63% 향상되었지만 억제성 수용체의 발현은 변화가 크지 않았다. 증폭한 후 NK 세포의 백혈병 세포 K562, 폐암 세포 A549, 간암 세포 SMMU-7721 및 유방암 세포 MCF-7에 대한 살해 활성은 각각 19%, 29%, 26% 및 28% 향상되었으며, 그 ADCC 활성은 (33±5.6)%에서 (65±12)%로 향상되었다. 방안에 TKD을 첨가한 후 NK 세포의 살해 활성은 (86±4)%에서 (96±2)%로 향상되었다. 종양 환자의 NK 세포에 대하여, 새로운 증폭 방안은 NK 세포가 말초혈액 단핵세포(Peripheral blood mononuclear cells, PBMC) 내에서 발현율을 (90.0±8.0)%까지 향상시켰으며 또한 NK 세포의 K562 세포에 대한 살해 활성을 약 17% 향상시켰다. 결론: K562 유전자 재조합 세포에 IL-2 증폭을 결합하는 방안은 NK 세포를 효율적으로 증폭시킬 수 있을 뿐만 아니라 그 살해 활성도 뚜렷하게 활성화할 수 있으며, 증폭 및 활성화된 NK 세포는 임상 치료의 수요를 만족시킬 수 있다. |
