| 저자(한글) |
HUANG, Yu,ZHU, Yu-min,DONG, Shi-juan,YU, Rui-song,ZHANG, Yuan-shu,LI, Zhen |
| 초록 |
최근 몇 년간 머스코비오리 파보바이러스(Muscovy duck parvovirus, MDPV)가 새로운 유행 추세를 보였는데, 바이러스 유전자의 변형과 관련될 수 있다. 그러므로 새로운 바이러스 균주에 대한 새로운 검측 방법이 필요하다. 본 연구는 머스코비오리 파보바이러스(MDPV) 2012년 분리 균주 SAAS-SHNH의 전체 유전자 서열을 바탕으로 특이성 프라이머를 설계하고, PCR 기술로 전체 길이의 vp3 유전자를 증폭시켰다. 그의 정확성을 감정한 후 상동성 비교 분석을 수행하였다. 동시에 해당 유전자를 PET28a 벡터에 복제하여 PET28a-VP3 원핵발현 벡터를 구축하였다. 형질전환 및 IPTG 유도 후 SDS-PAGE 전기영동과 Western blotting 분석을 통하여, 예상했던 크기에 부합되는 63.1 kDa의 단백질을 발현하였다. 이 단백질은 임상에서 수집하여 면역 처리한 MDPV의 머스코비오리 혈청과 결합할 수 있다. 해당 단백질을 MDPV의 혈청학 검측에 사용할 수 있다는 것을 설명한다. 정제 후 단백질로 뉴질랜드 토끼를 면역시켜 토끼 MDPV-VP3 단백질의 다중 클론 항체를 제조하였다. 토끼 혈청은 MDPV 약독성 백신 및 J3D6주 VP3 단백질과 특이적으로 결합할 수 있다; MDPV로 오리의 1차 배아 섬유아세포(fibroblast)(DEF)를 감염시킨 후 토끼 혈청을 이용하여 면역 형광(immune fluorescence assay, IFA) 분석을 수행하였다. 그 결과 DEF 세포핵과 세포질에서 모두 VP3 단백질을 검측할 수 있었다. VP3 단백질을 이용하여 제조한 항혈청을 MDPV 면역 형광 분석을 이용한 세포 증식의 바이러스 검측에 활용할 수 있다는 것을 설명한다. 이는 앞으로 MDPV를 신속하게 검출하는데 기술적 기초를 제공하였다. |
