| 저자(한글) |
WANG, Cui-jie,HUANG, Yong-dong,KONG, Ying-jun,LUO, Jian,ZHANG, Gui-feng,ZHAO, Dong-xu,SU, Zhi-guo,MA, Guang-hui |
| 초록 |
안티트롬빈 Ⅲ(antithrombin Ⅲ, AT Ⅲ)은 인체 내에서 중요한 항혈액응고제로서, 형질전환 유전자 기술을 이용한 재조합 인간 안티트롬빈 III(rhATIII)의 생산에 대한 연구가 점점 많은 주목을 받고 있다. 형질전환 양젖에서 rhAT Ⅲ을 어떻게 효과적으로 분리 정제하는가 하는 것은 이 물질의 산업화를 실현하는 핵심 문제이다. 본 연구는 등전점(pI) 침전과 헤파린의 친화성 크로마토그래피(heparin affinity chromatography) 기반의 정제 공정을 구축하여, rhAT Ⅲ을 빠르면서 고효율적으로 정제하는데 성공했다. 우선 등전점 침전법을 사용하여 총 단백질의 약 50%를 차지하는 카세인(Casein)을 신속하게 제거하였다; 그리고 헤파린의 친화성크로마토그래피를 사용하여 rhAT Ⅲ을 정제하고 pH 값과 온도가 rhAT Ⅲ의 정성에 미치는 영향, pH 값과 작업 조건(세탁 구배, 유속과 샘플에 사용된 양)이 rhAT Ⅲ의 분리 효과에 미치는 영향을 계통적으로 고찰하였다. 최적화 조건에서 rhATⅢ의 순도가 99% 이상, 단백질의 수율이 90%, 활성 수율이 약 50%에 달했다. 본 실험에서 구축한 정제 공정은 그 작업 과정이 간단하고, 속도가 빠르며, rhATⅢ의 수율이 높다. 해당 결론은 앞으로 공정을 확대하는데 중요한 근거와 참고를 제공하였다. |
