| 저자(한글) |
WU, Hong-qing,QIN, Li-na,CHEN, Xiu-zhen,HUANG, Jian-zhong,DONG, Zhi-yang |
| 초록 |
트리코더마 레세이(Trichoderma reesei) 내에서 이중 유전자 위치지정의 통합을 1차적으로 빠르게 행할 수 있는 상동성 재조합 방법을 건립하였는데, 이는 트리코더마 레세이 유전자가 차례로 하나하나 제거되면서 그 주기가 긴(long-cycle, 소요시간 상당) 등 문제를 잘 해결하였다. 트리코더마 레세이의 만나나아제 유전자(mannanase gene, man5A)를 재조합 발현의 리포터 유전자로 하고, 1차적인 형질전환을 통해 해당 유전자를 셀룰라아제 I(cellobiohydrolase I, cbh1) 유전자의 위치에 합류시켜, 셀룰라아제 유전자인 cbh1과 cbh2가 동시에 결실되면서, Manl2이라는 재조합 공학 균주를 획득하였다. 재조합 공학 균주인 Manl2를 초기 균주인 Tu6Aku70과 쉐이킹 플라스크(shake flask) 방법으로 발효시킨 결과, 재조합 공학 균주의 만나나아제의 생성량은 초기 균주에 비해 10배 향상되었고, 셀룰라아제의 생성량은 60% 감소되었으며, 세포 외 총단백질 분비수준은 40% 감소되었다. 실시간 중합효소연쇄반응(Real-time PCR) 기법을 이용하여 셀룰라아제 유전자(man5A)의 전사 수준을 검측한 결과, 재조합 균주는 초기 균주에 비해 전사 수준이 25배 향상되었다. 본 논문은 트리코더마 레세이에서 두 유전자의 위치지정의 통합을 1차적으로 실현하는 방법을 최초로 보고하였는데, 이는 유전자 공학 수단을 이용하여 재조합 단백질인 트리코더마 레세이 공학 균주의 고효율적인 발현을 실현하는데 일정한 지침적인 의미가 있다. |
