| 저자(한글) |
ZHANG, Qian,WANG, Zhen,ZHANG, Hui,LI, Rui-fang,JI, Tai-wang,ZHAO, Qing-liang,CHEN, Chuang-fu |
| 초록 |
【목적】Off virus의 F1L 유전자를 발현할 수 있는 재조합 산양두바이러스(goatpox virus)를 구축하고 생물학적 특성에 대한 초보적인 연구를 진행한다. 【방법】Off virus의 F1L 유전자와 전이 벡터(transfer vector) pUC-TK12를 연결시키는 동시에 LacZ 리포터 유전자(reporter gene)와 1개의 양방향 촉진제(bidirectional promoter)를 삽입하였다. 산양두바이러스를 접종한 BHK-21 세포에 재조합 전이 벡터를 형질주입한 후, 청반-백반 선별, 정화를 통하여 재조합 바이러스에 대한 연속 계대배양을 진행하였으며, PCR, 간접 면역 형광과 Western 면역 블러팅(immunoblotting) 등 기법으로 감정하였다. 재조합 바이러스를 다양한 온도, pH값, 유기 용제와 자외선 조사로 처리하였으며, TCID 50 평가를 진행하였다. rGpv-F1L로 생쥐를 면역시킨 후, ELSA(enzyme-linked immunosorbent assay) 실험을 통하여 특이성 항체 수준을 측정하였다. 【결과】재조합 바이러스의 전이 벡터 pTL-F1L를 성공적으로 구축하였으며, 전이 벡터를 BHK-21 세포에 형질주입한 후, 플라크(plaque)를 정화하여 유전 안정성을 갖춘 rGpv-F1L를 얻었다. 간접 면역 형광과 Western 면역 블러팅 검사를 이용하여 해당 재조합 바이러스가 F1L 단백질을 안정하게 발현할 수 있다는 것을 발견하였다. 55℃ 30min 혹은 자외선을 1시간 비추어 재조합 바이러스를 불활성화할 수 있었으며, 또한 강산, 강알칼리, 유기 용제 등에 대하여 민감한 반응을 보였다. 재조합 산양두바이러스를 접종시킨 생쥐는 40일 내에 높은 수준의 특이성 항체를 지속적으로 생성할 수 있었으며, Gpv 바이러스를 접종시킨 그룹과의 차이가 아주 뚜렷하였다(P 【결론】Off virus F1L 유전자를 안정하게 발현할 수 있는 재조합 산양두바이러스 백신 후보를 얻었으며, 해당 재조합 바이러스는 양호한 항원성과 생물학적 활성을 갖고 있었다. 동시에 양 전염성 농포성 피부염( Ovine contagious ecthyma )과 양두( capripox)의 예방에 새로운 경로를 제공하였다. |
