| 저자(한글) |
HUANG, Jing,REN, Yang,YU, Xiu-feng,ZHOU, Xi-hong,WANG, Yi-zhen |
| 초록 |
AMPK(adenosine monophosphate activated protein kinase) 효소는 진핵세포 생물에 광범위하게 존재하는 생체 에너지 대사 조절 핵심효소이다. 본 연구의 목적은 돼지(Sus scrofa) AMPK alpha; 유전자의 유효 siRNA 간섭벡터를 구축하고 선별하는데 있다. 더불어 AMPK alpha; 유전자가 지방 분해 핵심효소 유전자 발현에 미치는 영향을 논의하였다. 돼지 AMPK alpha; 유전자(유전자은행 등록번호: NM-001167633) 전 구간 cDNA 서열에 근거하여 2쌍의 특이적 2중 가닥 siRNA 프라이머를 설계 및 합성한 다음 pSilencer 4.1-CMV neo Vector에 복제하여 주입한다. 그 다음 돼지 AMPK alpha; 유전자 siRNA 진핵 발현 벡터 RA1 및 RA2를 구축한다. 마지막으로 PCR, 2중 효소절단, 서열측정을 통하여 구축한 발현 벡터를 검증한다. 검증을 거친 간섭 벡터를 돼지 근내지방전구세포에 형질주입한 다음, 간섭 효과 그리고 지방분해 핵심효소인 호르몬 민감성 지질분해효소(hormone sensitive lipase, HSL), ATGL(adipose triglyceride lipase), 카르니틴-팔미토일 전이효소 1(carnitine palmitoyl transferase, CPT1)의 유전자 발현에 미치는 영향을 검사한다. 검사 결과, 돼지 AMPK alpha; 유전자 특이성 siRNA 발현 벡터 RA1 그리고 RA2 모두 AMPK alpha; mRNA의 발현을 저하(P lt;0.05)시켰고 RA2 간섭 효과는 RA1보다 효과적이었다. AMPK alpha;가 RA2에 의해 간섭을 받은 뒤, 돼지 근내지방전구세포 AMPK alpha; 및 지방분해 핵심효소 HSL, ATGL, CPT1 유전자 발현량은 뚜렷하게 하강(P lt;0.05)하였다. 이는 AMPK alpha; 유전자 발현이 억제된 후, 돼지 근내지방전구세포의 지방분해 그리고 지방산 산화속도가 저하되었음을 의미한다. 본 연구 결과는 AMPK alpha;가 돼지 지방대사에 관여하는 메커니즘 그리고 영양조절 유전자에 의한 돼지 지방 축적을 깊이 연구하는데 기초적인 정보를 제공한다. |
