| 초록 |
[목적] 바큐로바이러스 발현시스템(Baculovirus expression system)을 이용하여 벼 줄무늬 잎마름병 바이러스(Rice stripe virus, RSV) RNA 중합효소(RdRp) 유전자의 곤충 세포 내에서의 발현을 실현하고자 한다. [방법] RT-PCR기법을 이용하여 RdRp 유전자 기능구역의 조각을 증폭한 후, pFastBacHTb 운반 벡터에 복제하고 대장균 DH10Bac에 전환하여, 재조합 바큐로바이러스 발현 벡터인 Bacmid-rp를 획득한다. Bacmid-rp에서 DNA를 추출하여, Sf9 세포에 형질 전환하여 재조합 바이러스인 vAc-rp를 획득한다. 재조합 바이러스인 vAc-rp를 Sf9 세포에 감염시켜 표적 단백질의 세포내에서의 발현을 실현하고, 친화성 크로마토그래피(affinity chromatography)를 통해 정제한 후, SDS-PAGE기법을 이용하여 RdRp의 발현상황을 검측한다. 순화된 RdRp 단백질을 집토끼에게 면역 접종하여 다중 틀론 항체를 제조하고, Western blot기법을 이용하여 RdRp의 면역 원성(immunogenicity)을 분석한다. [결과] RSV RdRp 유전자 기능구역은 Sf9 세포 내에서 발현될 수 있는데, 그것의 단백질 분자량은 약 45kDa로서 예상했던 크기와 일치하였고, 아울러 RdRp 항혈청(antiserum)과 특이성 반응 현상을 일으킬 수 있었다. [결론] 진핵세포 내에서 RSV RdRp 유전자의 발현에 성공하였고 정제된 RdRp와 그것의 다중 클론 항체를 획득하였다. |
