| 저자(한글) |
ZHANG, Xiang,MA, Lei,TIAN, Yong-qiang,ZHANG, Guo-lin,LUO, Ying-gang |
| 초록 |
현재까지 애기장대(Arabidopsis thaliana)에서 복합 알칼로이드는 발견하지 못하였지만, 그 유전체 시퀀싱은 35개 이상의 유전자가 (S)-norcoclaurine synthase(NCS)를 코딩할 수 있다고 밝혔다. 본 연구에서는 우선 생화학적 특성, 메커니즘이 명확한 양귀비, 황련(Coptis japonica Makino), Thalictrum flavum와 금영화(Eschscholzia californica Cham.) 중의 NCS를 참고로 하여 애기장대 중 주석한 NCS와 함께 생물 정보학적 분석 및 비교를 진행하였으며, 그중에서 5개의 AtNCS를 선택하여 타깃 유전자로 한 후 특이 프라이머를 설계하였다. 그리고 애기장대에서 총 RNA를 추출한 후 RT-PCR 단일 단계법(one-step method)으로 상술한 유전자를 획득하였고, TA를 거쳐 상술 유전자를 복제한 후 pGM-T 벡터에 전입하였으며, 선별, 효소 소화 및 PCR 감정과 DNA 시퀀싱을 거쳐 그들의 핵산 서열을 검증하였다. 따라서 검증한 AtNCS 유전자는 PCR 증폭, 플라스미드 구축을 거쳐 Escherichia coli BL21(DE3)로 전입된 후 이형 발현(heterologous overexpression)과 단백질 정제를 진행하였다. 전체 세포, 세포 용해액(cell lysate), 세포 용해액의 상청액(supernatant)과 정제 단백질 등 4개 단계에서의 AtNCS 효소 기능 특성을 연구한 결과, 타깃 산물 혹은 새로운 산물의 형성은 발견하지 못하였으며; 상술한 유전자의 구체적 기능은 아직 심층적인 연구가 필요하다. |
