| 초록 |
ARHGAP36은 Rho GAPs 패밀리의 일원이다. 수모세포종(medulloblastoma)에서 과발현하며 세포 증식에 참여하는 것으로 판단된다. 양(sheep)의 정자 발생 과정에서 ARHGAP36의 작용을 연구하기 위해, cDNA 말단 신속 증폭(rapid amplification of cDNA ends, RACE) 기술을 사용하여 면양의 고환 조직으로부터 SARHGAP36의 cDNA 전구간 서열을 복제하였다. 내부 영역 cDNA 서열과 두 말단을 증폭하여 얻은 5′ RACE, 3′ RACE 서열을 분석한 후 연결한다. 연결을 통해 길이가 2,698 bp인 면양 ARHGAP36의 cDNA 전구간 서열을 획득하였다. 여기에 1,593 bp 길이의 개방형 해독틀(ORF)과 530개 암호화 아미노산 서열이 포함되었다. 획득한 서열과 UniProt에서 예측한 소(cattle) ARHGAP36 아미노산 서열(A7MB27)과의 상동성은 98%였다. 이는 복제한 cDNA는 Rho GAP 패밀리의 ARHGAP36이라는 것을 설명한다. 복제한 면양 ARHGAP36의 아미노산 서열과 UniProt 데이터베이스로부터 수집한 기타 모든 ARHGAP 구성원의 아미노산 서열을 비교 분석한 결과, 기타 ARHGAP가 모두 가지고 있는 대표적 '아르기닌 핑거(arginine finger)' 모티프(motif)는 ARHGAP36에 없었고 대응하는 모티프 중의 보존적 아르기닌 잔기는 트레오닌에 의해 대체되었다. 이는 ARHGAP36은 효소촉매 활성에 의존하지 않고 자기 기능을 수행할 가능성이 매우 크다는 것을 암시한다. 복제한 cDNA 서열과 GenBank에 등록된 면양 arhgap36 서열과의 비교를 통해, 면양 arhgap36 유전체 서열분석 결과 가운데의 첫번째 엑손에 일부 DNA가 빠진 것을 발견하였다. 따라서 이러한 유전체 서열을 사용하여 면양 ARHGAP36의 cDNA를 예측할 경우 정확하게 아니모산을 암호화 할 수 있는 cDNA를 얻을 수 없다. 본 실험은 ARHGAP 패밀리의 특수한 일원인 ARHGAP36의 기능을 심층 연구하는데 정확한 cDNA 서열을 제공하였다. 면양 고환의 전체 단백질에 대한 Western blot 분석을 통해 면양 고환에서 3가지 길이의 ARHGAP36을 발견하였다. 또한 면역조직화학 검사를 통해 면양 고환 정세관(seminiferous tubules)에서의 정자 발생 과정에서 ARHGAP36 단백질은 각종 세포에 모두 분포하는 것을 발견하였다. |
