| 저자(한글) |
CHEN, Meng-xue,LU, Xin-rui,MA, Yu,SUN, Ming-bo,LUO, Wei-jia,WANG, Pei-qi,ZHANG, Meng-yue,ZHANG, Yi-xuan |
| 초록 |
본 논문은 표적 단백질인 포스파티딜세린 합성효소(phosphatidyl serine synthase, PSS)의 발현을 증가시키기 위해 rTaq 효소로 대장균 K12(E coli K12)의 총 DNA에서 PCR 증폭하여 포스파티딜세린 합성효소 유전자 단편을 획득하였다. 해당 유전자 단편을 고효율 발현 벡터 pET28b 플라스미드와 재조합(recombination)한 후 대응되는 발현 균주에 형질전환하여 발현시켰다. 균주를 초음파 처리(ultrasonication)하여 획득한 PSS 함유 조효소액(crude enzyme solution)을 수집한 후, 2상 반응 시스템(two-phase reaction system)으로 생물학적 전환시켰다. 그리고 HPLC-ELSD 수단으로 효소 활성을 검사하였다. 연구 결과, 재조합 균주에서 PSS의 활성은 대조 그룹에 비하여 조금 증가하였으며, 또한 효소 활성이 증가된 돌연변이 유전자 pssE210G를 획득하였다. 돌연변이 유전자를 고효율 발현 벡터 pBAD-MCS와 재조합시킨 후 대응되는 숙주 균주에 전환하여 발현시켰다. 연구 결과, 대장균 TOP10(pBAD-MCS-pss)에서 발현하는 효소 활성은 대장균 BL21(pET28b-pss)에서 발현하는 효소 활성보다 뚜렷하게 높았다. 실험 결과, 표적 유전자와 고효율 발현 플라스미드의 재조합은 효소 활성 증가에 유리하고, 서로 다른 발현 플라스미드와 재조합하면 효소 활성 증가 수준도 서로 다르며, 포스파티딜세린 합성효소 유전자의 제73 위치 아미노산을 돌연변이 시키면 해당 효소의 구조와 효소 활성에 직접적인 영향을 미치는 것으로 나타났다. |
