Expression and enzyme activity of Sulfolobus virus dUTPase gene
기관명 | NDSL |
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저널명 | 應用與環境生物學報 = Chinese journal of applied and environmental biology |
ISSN | 1006-687x, |
ISBN |
저자(한글) | ZHU, Guo-dong,WEI, Yun-lin,ZHANG, Qi,JI, Xiu-ling,LIN, Lian-bing |
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저자(영문) | |
소속기관 | |
소속기관(영문) | |
출판인 | |
간행물 번호 | |
발행연도 | 2014-01-01 |
초록 | Sulfolobus virus STSV2 dUTP pyrophosphatase(dUTPase) 유전자에 대해 복제 및 발현하고 그 효소학적 특성을 분석하였다. STSV2의 dUTPase 유전자 서열에 근거하여 특이성 프라이머를 설계하였으며, 바이러스 STSV2 DNA를 템플릿으로 PCR 증폭을 진행하였다. 산물을 원핵 발현 벡터 pET32a(+)에 복제하였으며, 다음 이를 Escherichia coli BL21(DE3)에 전환시켜 dUTPase의 IPTG 유도 발현 및 정화를 진행하였다. SDS-PAGE를 통하여 크기를 검출하였고 또 그 효소 활성을 측정하였다. 측정 결과, 유도 발현한 재조합 dUTPase 단백질 분자량(M r )은 약 38×10 3 (pET32a(+) 자체의 가용화 태그를 포함)이었으며, Mg 2+ 이 존재하는 경우에 재조합 dUTPase는 dUTP에 특이성 촉매작용을 하여 dUMP와 PPi를 생성할 수 있고, 그 반응 최적 온도는 60℃이며, pH값이 3-8 사이일 때 비교적 높은 활성이 있다. 또한 PCR 증폭 효과와 특이성을 향상시키는 분야에서 일정한 작용을 갖고 있다. 본 연구는 복제 발현을 통하여 Sulfolobus virus STSV2 dUTPase를 얻었으며, 유전자 증폭 분야에서 일정한 응용적 가치를 갖고 있다. |
원문URL | http://click.ndsl.kr/servlet/OpenAPIDetailView?keyValue=03553784&target=NART&cn=NART71559359 |
첨부파일 |
과학기술표준분류 | |
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ICT 기술분류 | |
DDC 분류 | |
주제어 (키워드) | Sulfolobus virus,dUTP pyrophosphatase,PCR amplification efficiency,prokaryotic expression,enzymatic activity,Sulfolobus virus,dUTP pyrophosphatase,PCR 증폭 효과,원핵 발현,효소 활성 |