Cloning, expression and characterization of a novel phospholipase A1 gene from the metagenomic library of mangrove soil
기관명 | NDSL |
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저널명 | 微生物學通報 = Microbiology |
ISSN | 0253-2654, |
ISBN |
저자(한글) | FENG, Juan,LI, He |
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저자(영문) | |
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소속기관(영문) | |
출판인 | |
간행물 번호 | |
발행연도 | 2015-01-01 |
초록 | [목적] 메타유전체학(metagenomics) 방법을 이용하여 홍수림(mangrove) 토양에서 신형의 에스테르 가수 분해 효소(ester hydrolase)를 선별하였다. [방법] 홍수림 토양의 메타유전체 라이브러리(Metagenome library)를 구축하고 트리부타린(Tributyrin)을 기질로 하는 기능 선별 방법을 사용하여 선별한 양성 클론(Positive clone)에 대해 계통 발육수(Phylogenetic tree) 분석을 진행하였으며 신형 포스포리파아제(Phospholipase) A 1 유전자의 원핵 발현(Prokaryotie expression)을 구현하고 재조합 효소의 효소학 성질(Enzymatic properties)을 연구하였다. [결과] 신형의 포스포리파아제 A 1 인코딩(encoding) 유전자 phop1413(GenBank 등록 번호: KF767097)을 선별하였다. 서열 측정(sequencing) 결과, 해당 유전자의 전체 길이는 1,413bp이고 470개의 아미노산 잔기(residue)에 대해 인코딩을 진행할 수 있으며 발현 단백질은 약 51.7kD이고 발현량은 220mg/L에 도달하였으며 NCBI에서 BLAST 비교 및 계통 진화수(phylogenetic tree) 분석을 통하여 해당 단백질은 포스포리파아제 유형의 FAMILY VI 가계에 속한다는 것을 밝혔다. 효소학 분석 결과, 해당 재조합 효소의 최적 반응 기질은 p-니트로페닐에스테르(p-Nitrophenyl caproate)이고 특정 효소 활성(specific enzyme activity)은 124U/mg이며 최적 반응 온도는 54°C이고 최적 pH 값은 7.8이다. 50°C 조건에서 1.5h 동안 열처리를 진행한 후 남은 상대적 효소 활성은 44%이고 아주 좋은 열 안정성(thermostability)을 나타낸다. [결론] 메타유전체 라이브러리 구축에서 기능 선별 방법을 이용하여 신형의 포스포리파아제 A 1 유전자를 얻었다. 연구에서 얻은 신형 포스포리파아제 A 1 유전자의 성질은 비교적 좋고 이는 식물성 기름 효소 탈 고무(Enzymatic degumming)에 응용된다. |
원문URL | http://click.ndsl.kr/servlet/OpenAPIDetailView?keyValue=03553784&target=NART&cn=NART75845775 |
첨부파일 |
과학기술표준분류 | |
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ICT 기술분류 | |
DDC 분류 | |
주제어 (키워드) | Metagenome library,Phospholipase,Cloning and expression,Enzymatic properties,메타유전체 라이브러리,포스포리파아제,복제 발현,효소학 성질 |