| 저자(한글) |
ZHANG, Li-lin,TANG, Qing-lan,XU, Qing-zhong,LEI, Ting-wen,LI, Hong-mei |
| 초록 |
인간 섬유아세포성장인자 21(fibroblast growth factor 21, FGF21) cDNA의 원핵 발현(prokaryotic expression) 벡터를 구축한 후 해당 재조합 단백질의 발현을 유도하였다. 인간 간(liver)에서 총 RNA를 추출한 후 RT-PCR로 표적 단편을 증폭하여 얻었으며, 표적 단백질의 T 벡터를 구축하여 보존하였다. 그리고 재조합 원핵 발현 벡터 pET-28a(+)-h FGF21를 구축한 다음 재조합 플라스미드를 대장균 균주 BL21(DE3)에 전환하였다. IPTG 유도 작용으로 가용성 발현 산물을 얻었고, 친화성 크로마토그래피(affinity chromatography)로 발현 산물을 정제한 후 웨스턴 블롯(Western blot) 검정을 진행하였다. 재조합 플라스미드 pET-28(+)-hFGF21를 성공적으로 구축하였다. 해당 플라스미드에 대하여 가용성 발현을 진행한 후 성공적으로 his-hFGF21을 정제하여 얻었다. 웨스턴 블롯(Western blot) 검정을 진행한 결과, 해당 융합 단백질은 FGF21 항체와 특이적으로 결합할 수 있었다. 성공적으로 pET-28(+)-hFGF21를 구축하였으며, 또한 his-hFGF21 단백질을 가용성 발현하였다. |
