| 저자(한글) |
LIU, Qin,CHEN, Fang,YANG, Li-jun,WANG, Li-ping,ZHU, Yi-liang,ZHANG, Yi |
| 초록 |
목적: 냉동보존(cryopreservation)이 토끼 지방유래 중간엽 줄기세포(adipose-derived mesenchymal stem cells, rADMSCs) 부분적 생물학 특성에 미치는 영향을 연구한다. 기법: 조직 절편 배양법(tissue explants adherent method)을 사용하여 토끼 지방유래 중간엽 줄기세포를 분리 배양한다. 도립현미경(inverted microscopy)을 사용하여 초기 세포(primary cells)의 세포 형태를 관찰하고 유세포 분석기를 사용하여 토끼 지방유래 중간엽 줄기세포의 면역표현형(immunophenotypes)을 검사한다. 3대 토끼 지방유래 중간엽 줄기세포를 -196℃ 액체 질소에 넣어 반년동안 보존한 후 37℃에서 해동하여 7대까지 계대배양한다. 실험은 두 그룹으로 나누어 진행한다. 실험 그룹은 냉동보존하였다가 해동하여 7대까지 계대배양한 토끼 지방유래 중간엽 줄기세포이고, 대조군은 냉동보존을 거치지 않고 7대까지 계대배양한 토끼 지방유래 중간엽 줄기세포이다. 그리고 MTT 방법을 사용하여 성장곡선을 작성한다. 지방형성(adipogenic) 유도액과 골형성(osteogenic) 유도액을 첨가하여 유도한 다음, 오일 레드 오(oil red O) 염색과 알리자린 레드(alizarin red) 염색 및 알칼리 포스파타아제 활성 분석법으로 각각 검사한다. 결과: 체외 배양한 토끼 지방유래 중간엽 줄기세포는 방추상(spindle-shaped) 섬유화 세포 형태를 나타냈고 성장력은 왕성하였다. 유세포 분석기 검사 결과, 3대 토끼 지방유래 중간엽 줄기세포는 CD44와 CD90을 강하게 발현하였고 조혈세포 관련 표면 마커(surface marker) CD45를 음성 발현하였다. 두 그룹 세포의 성장곡선은 전형적인 S형이었고 통계학적 차이는 없었다(P gt;0.05). 지방 형성 유도액으로 14일 유도 후 oil red O로 염색한 결과는 양성이었고, 골형성 유도액으로 2주 유도 후 알리자린 레드로 염색한 결과는 양성이었다. ALP 발현 활성은 골형성 유도 시간이 길어짐에 따라 끊임없이 증가하였고 통계학적 차이는 없었다(P gt;0.05). 결론: 냉동보존 후의 토끼 지방유래 중간엽 줄기세포 체외 성장 및 다능성 분화 잠재력에 뚜렷한 변화가 없었다. |
