| 저자(한글) |
LUO, Chan,RUAN, Qiu-yan,LEI, Chuan,XU, Yong-ru,LU, Feng-hua,JIANG, Jian-rong,SHI, De-shun |
| 초록 |
본 연구의 목적은 고효율적인 물소 세포 형질전환 방법을 얻는 것이다. 본 연구에서는 먼저 물소 태아 섬유아세포(buffalo fetal fibroblast, BFF)를 연구 대상으로, 뉴클레오펙션(nucleofection) 기법을 구축하고 최적화하였다. 다음으로 뉴클레오펙션 기법, 리포솜(liposome) 기법, 전기천공법(electroporation)의 BFF 형질전환 효율을 비교하였다. 마지막, 비교적 우수한 방법을 선택하여 물소 원시 골수 간엽 줄기세포 및 유사 배아 줄기세포의 실행 가능성을 토의하였다. 연구 결과, 전압의 증가와 더불어 뉴클레오펙션 기법에 따라 BFF를 형질전환시키는 효율은 향상되었다. 뉴클레오펙션 형질전환의 전압이 225 V, 펄스 시간이 10 ms일 경우, 세포 EGFP 양성율(positive rate)이 (83.1±1.4)%이었으며, 형질전환 효율이 리포솜 기법[(11.7±1.2)%]과 전기천공법[(35.5±2.0)%]보다 뚜렷하게 높았다. 최적화된 뉴클레오펙션 조건을 이용하여 외래 유전자를 물소 원시 골수 간엽 줄기세포와 유사 배아 줄기세포에 도입할 수 있으며 세포의 생물학적 특성에는 영향을 미치지 않았다. 본 연구는 다능성 줄기세포를 유도로 하는 물소 형질전환 클론 배아의 생산에 대해 기초를 다졌다. |
