| 초록 |
【목적】Aureobasidium pullulans의 폴리말산(polymalic acid) 중합 경로의 말산-CoA 리가아제(malate-CoA ligase) 유전자 및 효소학적 특성을 연구한다. 【방법】합병 프라이머를 설계한 후, IPRC 기술을 이용하여 Aureobasidium pullulans CCTCC M2012223의 유전체로부터 말산-CoA 리가아제 유전자의 cDNA 전체길이 서열을 증폭하고, 발현 벡터를 구축하였다. 대장균 이종 발현( heterologous expression ), Ni-NTA 칼럼 크로마토그래피(column chromatography)를 통하여 효소 단백질을 정제하고 효소학적 특성을 분석하였다. 【결과】말산-CoA 리가아제 유전자 서열의 전체 길이는 1,498 bp이고, 440 aa를 코딩할 수 있었으며, 4개 엑손(exon)과 3개 인트론(intron)을 갖고 있었다. 해당 재조합 효소 반응의 최적 온도는 25℃, 반응의 최적 pH값은 8.0였으며, 고농도 기질 ATP는 효소의 활성에 뚜렷한 억제작용을 하였다. 단량체의 선택성은 기질이 옥살산(oxalic acid), 옥살로아세트산(oxaloacetic acid), 부티르산(butyric acid), 말론산(malonic acid)에 대해서도 아주 양호한 촉매 활성을 갖고 있다는 것을 제시한다. 【결론】Aureobasidium pullulans CCTCC M2012223로부터 폴리말산 중합 경로의 말산-CoA 리가아제 유전자를 성공적으로 클로닝하였는데, 이는 폴리말산 중합 경로를 해석하고 새로운 분해성 소재를 개발하는 데 기초를 마련하였다. |
