| 저자(한글) |
CHEN, Fan-bing,SONG, Fei-fei,SHI, Peng,HUANG, Zhi-peng,GUAN, Xiong |
| 초록 |
영양생장기 살충 단백질(vegetative insectcidal protein, Vip)은 바실러스 튜링겐시스(Bacillus thuringiensis, Bt)가 영양생장기인 지수기 중기로부터 안정기에 분비, 생산하는 신형 살충인자로, Vip1, Vip2, Vip3 등 3가지 유형으로 분류되는데, Vip3에 대한 연구가 가장 깊다. Vip3A는 나비목(Lepidoptera) 해충에 대해 광범위한 살충 활성을 갖고 있으므로 중요한 연구 의미가 있다. 본 연구는 BtWB5 균주의 총 DNA를 템플릿으로 하고, PCR기법을 이용하여 vip3Aa(GenBank 등록번호: AAM22456) 전체길이를 증폭시켰으며, 해당 조각을 정제하고 회수한 후, pMD18-T과 연결시켜 대장균(Escherichia coli) DH5α에 형질도입함으로써, 효소절단을 검증하고 서열을 측정하였다. vip3Aa 유전자 조각과 같은 효소절단 처리를 거친 발현 벡터 pCzn1을 연결시켜 재조합 발현 벡터 pCzn1-vip3Aa을 구축하고, 대장균 ArcticExpressTM(DE3)에 형질도입한 후, 이소프로필-β-D-시오갈락토피라노시드(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG)으로 발현을 유도하였다. SDS-PAGE 결과, 침전물과 상청액에 모두 약 88 kD의 VIP3Aa 단백질 발현산물이 존재하였다. Ni 친화성 수지를 이용하여 상청액 중의 VIP3Aa 융합발현 단백질을 정제함으로써, 정제 단백질을 얻었다. 본 연구는 vip3Aa 유전자를 성공적으로 서브클로닝하고 VIP3Aa 단백질을 발현, 정제함으로써, 향후 곤충 중장 내 VIP3Aa 단백질의 작용 수용체를 연구하는데 기초 데이터를 제공하였다. |
