| 저자(한글) |
ZHOU, He,XU, Wen,LI, Ya-juan,QIN, Yan-jie,LI, Xia,MA, Tian-yu,XIAO, Yi-xiao,MA, Hai-yan |
| 초록 |
서로 다른 배수성(ploidy)의 미꾸라지 유전체 DNA 메틸화 수준 및 패턴을 얻기 위하여, 미꾸라지(Misgurnus anguillicaudatus)를 연구대상으로 하고, 직교실험을 이용하여 메틸화 민감성 증폭 다형성(Methylation sensitive amplification polymorphism, MSAP) 방법의 반응 시스템을 구축하였으며, 해당 방법을 이용하여 2배체 미꾸라지 지느러미 유전체 DNA에 대해 MSAP 분석을 진행하였다. 분석 결과, 최적 이중효소 절단 반응 시스템은 800ng의 미꾸라지 유전체 DNA에 대해, EcoRI, HpaII와 MspI를 각각 10U 이용하고, 37℃에서 8시간 반응시킨 후 효소 절단을 진행하는 것이다. 최적 예비 증폭 반응 시스템은 템플릿 4μL, 예비 증폭 프라이머 0.8μL, dNTPs 0.2mmol/L, Mg 2+ 1.5mmol/L와 Taq 1U이다. 최적 선택성 증폭 반응 시스템은 예비 증폭 산물을 20배 희석한 템플릿 2μL, 프라이머 1.5μL, dNTPs 0.375mmol/L, Mg 2+ 1.5mmol/L와 Taq 1U이다. 2배체 미꾸라지 전체 메틸화율은 각각 24.1%, 20.8%, 22.3%이며, 헤미(hemi) 메틸화율은 각각 41.4%, 20.8%, 33.3%이고, 총 메틸화율은 각각 65.5%, 41.6%, 55.6%이다. 연구 결과, 해당 반응 시스템은 안정적이고 신뢰적이며 반복성이 양호하고 다배체 미꾸라지 관련 연구에서 MSAP 기술의 응용에 기초를 마련하였다. |
