| 초록 |
지지체(Scaffold)와 연결단백질은 신호의 케스케이드(cascade) 전달에서 중요한 역할을 한다. 최근, Ego1/Ego3 단백질 복합체(complex)는 세포 내의 몸 표면에 있으면서 지지체 단백질의 작용을 하며, TORCl 신호 통로가 이미노산 풍도를 감지하는 과정에서 중요한 제어작용을 한다고 증명되었다. 해당 연구에서는 효모 Ego1과 Ego3 유전자를 클로닝하는 것을 통하여 이중 T7 촉진제의 원핵생물 이중매개체(binary vector)를 구축하였다. 대장간균에서 공동 발현과 세균에 대한 공동 파괴 및 서로 다른 저항성이 있는 두개 플라스미드에 대한 공동 전환 방법을 통하여 Ego1/Ego3 복합체(EGO complex)를 재조합하고 발현하였다. 실험 결과, Ego1이 Ego3 단백질과 함께 가용성 복합체를 형성할 수 있었지만, 정제한 후의 단백질 비례에는 뚜렷한 차이가 있었으며 Ego1이 분해되는 현상도 발생하였다. 한 세트의 히스티딘(Histidine) 라벨이 끊긴 Ego1과 전체 길이의 Ego3을 공동 발현시켰으며 pulldown을 정제하여 Ego1과 Ego3 간 상호작용 구간을 검증하였다. 실험 결과, pRSFDuet-mcs1 Ego1(35-184)과 pACYDuet-mcsl Ego3을 공동전환하여 비교적 안정되고 비례가 비교적 일치한 복합체를 공동발현, 정제할 수 있었다. 해당 실험 결과는 다음 단계로 진행하는 Ego1/Ego3 단백질 복합체에 대한 생물화학적 감정과 구조 생물학 연구에 기반을 마련하였다. |
