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논문 기본정보
Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of cytochrome P450 gene CYP4C62 from Nilaparvata lugens(Hemiptera: Delphacidae)
논문 개요
| 기관명 | NDSL |
|---|---|
| 저널명 | 昆蟲學報 = Acta entomologica Sinica |
| ISSN | 0454-6296, |
| ISBN |
논문저자 및 소속기관 정보
| 저자(한글) | SUN, Hai-xia,CHEN, Jun,YANG, Zhi-fan |
|---|---|
| 저자(영문) | |
| 소속기관 | |
| 소속기관(영문) | |
| 출판인 | |
| 간행물 번호 | |
| 발행연도 | 2014-01-01 |
| 초록 | [목적] 시토크롬(cytochrome) P450 모노산소첨가효소(monooxygenase)는 곤충의 성장 발육과 환경에 적응하는 과정에서 중요한 기능을 발휘한다. [기법] 본 연구는 벼멸구(Nilaparvata lugens)의 시토크롬 P450 유전자 CYP4C62의 개방해독틀(open reading frame, ORF)(신호 펩타이드를 코딩하는 서열 부분을 함유하지 않음)을 복제하였으며, 대장균(Escherichia coli)에서 고효율 발현을 실현하였고, Ni-NTA 아가로오스 겔 친화성 크로마토그래피법으로 정화하여 재조합의 CYP4C62 단백질을 얻었다. 해당 단백질을 일본종 굴토끼(Oryctolagus cuniculus) 수컷에게 면역시켜 항터끼(토끼에 저항)하는 CYP4C62 혈청 항체를 제조하였다. 간접적 ELISA 방법을 이용하여 혈청 항체의 역가(titer)를 검출하였다. 또한 Western 블롯 교잡(Western blot hybridization)을 통하여 해당 항체의 면역학적 특이성을 검출하였다. [결과] 대장균을 통하여 발현한 CYP4C62 단백질의 상대분자량은 56 kD이었다. 간접적 ELISA법으로 검출한 결과, 제조한 토끼 저항 CYP4C62 항체의 역가는 1:100,000에 달하였다. Western 블롯 교잡 결과, 해당 항체는 이형발현(Heterologous expression)의 CYP4C62 단백질과 특이결합할 수 있을 뿐만 아니라 벼멸구 총 단백질 중 내생의 CYP4C62와 특이결합할 수 있었다. 이는 해당 항체가 비교적 양호한 면역 반응 특이성을 갖고 있음을 증명하였다. [결론] CYP4C62 다클론항체의 성공적 제조는 벼멸구 각 조직에서 CYP4C62의 시공간적 발현 수준을 계속하여 분석하고, 면역조직화학법으로 해당 단백질의 조직, 세포 및 아세포 분포 법칙을 포지셔닝 분석(positioning analysis)하며 최종적으로 CYP4C62의 생물학 기능을 해석하는데 기초를 마련하였다. |
| 원문URL | http://click.ndsl.kr/servlet/OpenAPIDetailView?keyValue=03553784&target=NART&cn=NART70801049 |
| 첨부파일 |
추가정보
| 과학기술표준분류 | |
|---|---|
| ICT 기술분류 | |
| DDC 분류 | |
| 주제어 (키워드) | Nilaparvata lugens,cytochrome P450 gene,prokaryotic expression,protein purification,polyclonal antibody,immune specificity,벼멸구,시토크롬 P450 유전자,원핵 발현,단백질 정제,다클론항체,면역 특이성 |