| 저자(한글) |
RUAN, Jie,WENG, Ya-guang,ZHAO, Wei,XIONG, Xing-dong,ZHANG, Chun-long,LI, Jiang-bin,LIU, Gui-ping,HUANG, Chi-rong,FU, Si-ying,LIU, Xin-guang |
| 초록 |
[목적] Mmu-miR-107과 Cacna2d1 유전자 3'UTR 결합 사이트를 예측 및 검증한다. [방법] 생물정보학을 통하여 miR-107과 쥐 Cacna2d1 유전자 3'UTR의 결합 사이트를 예측하였는데, 3개 표적 사이트를 포함한 3'UTR 조각을 루시페라아제(luciferase) 벡터 pGL3 중에 복제하여 야생형 pGL3-Cacna2d1-WT3'UTR 벡터를 구축하였다. 또한, 오버랩 확장 PCR(overlap extension PCR, OE-PCR) 기술을 이용하여 각각 단일 돌연변이 사이트를 함유한 벡터 Mut1 200-207 , Mut2 361-367 , Mut3 902-908 과 동시에 3개 돌연변이 결합 사이트를 함유한 벡터 Mut4 plus 를 구축하였다. 각 재조합 플라스미드와 miRNA mimics를 C2C12 세포에 공동 형질전환시켜 루시페라아제 활성을 검출하였다. [결과] 공동 형질전환한 pGL3-Cacna2d1-WT3'UTR과 miR-NC 그룹에 비해, 공동 형질전환한 pGL3-Cacna2d1-WT3'UTR과 mimics-miR-107 그룹의 루시페라아제 활성은 뚜렷하게 감소하였다(P 361-367 /Mut3 902-908 과 mimics-miR-107 그룹의 루시페라아제 활성은 감소하였다(P 200-2077 /Mut4 plus 와 mimics-miR-107 그룹의 루시페라아제 활성은 뚜렷하게 감소하지 않았다(P gt;0.05). [결론] Cacna2d1 유전자 3'UTR 구간의 루세페라아제 유전자 보고 벡터 및 돌연변이체를 성공적으로 구축하였으며, miR-107과 Cacna2d13'UTR의 200-207 사이트 결합을 초보적으로 증명하였다. |
