- HOME
- 홈페이지 이용안내
논문 기본정보
Expression, purification and characterization of catalytic domain of protein kinase D1 in baculovirus-insect cell expression system
논문 개요
| 기관명 | NDSL |
|---|---|
| 저널명 | 生物工程學報 = Chinese journal of biotechnology |
| ISSN | 1000-3061, |
| ISBN |
논문저자 및 소속기관 정보
| 저자(한글) | LI, Zhi-hong,Wang, Qiming#Jane |
|---|---|
| 저자(영문) | |
| 소속기관 | |
| 소속기관(영문) | |
| 출판인 | |
| 간행물 번호 | |
| 발행연도 | 2014-01-01 |
| 초록 | 단백질 키니아제 D(Protein kinase D, PKD)는 새로운 세린/트레오닌(serine/threonine) 단백질 키나아제 패밀리와 디아실글리세롤(Diacylglycerol, DAG) 수용체로서 세포 내 다양한 생리 생화학 과정에 참여한다. 높은 순도의 PKD1을 수득하는 촉매 도메인(catalytic domain)(PKD1-cat)을 결정학 구조 연구에 응용하기 위해, GST 마커 표기의 PKD1-cat 유전자를 바큐로바이러스(baculovirus) 벡터 pFastBac1 내에 복제하여 재조합 플라스미드를 구축하였다. 재조합 플라스미드를 왕복 발현 벡터 Bacmid의 DH10Bac 감수성 세포 내에 전환, 전이 후 표적 유전자 GST-PKD1-cat를 함유한 재조합 Bacmid를 획득하였다. 재조합 Bacmid DNA로 Sf9 곤충 세포를 형질전환시켜 재조합 바큐로바이러스를 획득한 후, 독성이 퍼지게 하였다. 5 PFU/cell 감염다중도의 독종으로 현탁 배양의 T. ni 곤충세포를 감염시키고 SDS-PAGE와 Western blotting 기법으로 발현 산물을 검측하였다. 실험 결과, 발현산물의 분자량이 약 68 kDa인 위치에 존재하는 특이성 밴드는 GST 단일 복제 항체와 반응할 수 있다. 재조합 단백질을 글루타티온 세파로오스 친화성 크로마토그래피(Glutathione sepharose affinity chromatography)로 정제하고 PreScission Protease로 GST 마커를 제거하여 순도가 매우 높고, 분자량이 약 42 kDa인 표적 단백질 PKD1-cat를 획득하였다. 체외 PKD 키나아제 활성 실험 결과, PKD1-cat 농도 증가에 따라 키나아제 활성이 증가하였다. 해당 결론은 절단한 재조합 PKD1-cat의 촉매 활성과 순도가 매우 높다는 것을 설명한다. 이는 핵자기공명 혹은 결정학 방법에 의한 PKD1-cat 3차원 구조 해석에 기반을 마련하였다. |
| 원문URL | http://click.ndsl.kr/servlet/OpenAPIDetailView?keyValue=03553784&target=NART&cn=NART71327230 |
| 첨부파일 |
추가정보
| 과학기술표준분류 | |
|---|---|
| ICT 기술분류 | |
| DDC 분류 | |
| 주제어 (키워드) | protein kinase D,catalytic domain,insect cell,baculovirus expression system,protein expression,purification,단백질 키나아제 D,촉매 도메인,곤충 세포,바큐로바이러스 발현계,발현,정제 |