| 저자(한글) |
CAO, Wei-wei,LIU, Wei,GAO, Yuan,WANG, Wei-shan,SHI, Chen-hui,CHEN, Zhao,HE, Jian-wei |
| 초록 |
[목적] 생리학적 상태(physiological state)에서 인간 골육종 세포 내 p38 유사분열촉진물질-활성 단백질 키나아제(p38 mitogen-activated protein kinases, p38MAPKs)가 인산화되는 과정을 관찰한다. [방법] 우선 ECFP-p38MAPK-Citrine(p38MAPK 바이오센서) 융합단백질 발현 벡터에 대한 구축 및 감정 작업을 진행하고, 그 다음 MG-63세포에 형질 전환하며, 24시간이 지난 후 형질전환 효율(transfection efficiency)과 융합단백질의 발현 상황을 관찰한다. 형광현미경 조건에서, Meta Flour FRET 4.6 소프트웨어를 응용하여 형질전환 생장인자-β1이 MG-63세포에 자극을 주기 전과 후의 p38MAPK 바이오센서의 형광 공명 에너지 전이(flurorescence resonance energy transfer, FRET)의 변화 상황을 측정한다. [결과] p38MAPK 바이오센서의 형질전환 효율은 30%~40%에 도달하였고, 모두 세포질과 세포핵 내에 분포되어 있었다. 형질전환 생장인자-β1이 MG-63세포에 자극을 주면, 세포질과 세포핵 내의 형광 공명 에너지 전이 비율(Citrine/CFP)은 신속하게 증가되었는데, 약 30분이 지나서 최대치에 도달하였다. 특이성 p38MAPK 억제제인 SB-203580은 세포와 공동으로 배양한 후, FRET 비율은 점차적으로 감소되었다. [결론] 형광 공명 에너지 전이 기법의 응용은 생세포(living cells)의 생리학적 상태에서 p38MAPK가 인산화되는 시공간적 정보를 실시간적으로 동적 감시할 수 있었다. |
