| 초록 |
본 논문은 Thymidine phosphorylase의 고생산 균주에 대한 신속하고 간편한 초기 선별법(Pre-screening method)과 자외선 돌연변이(UV mutagenesis) 육종에서의 응용 과정을 구축하였다. 실험 결과, 액체 배양기에 25 mmol/L 티미딘(Thymidine)을 첨가했을 때 균체의 생장은 영향을 받지 않았다. 그 뿐만 아니라 균체의 Thymidine phosphorylase가 티미딘을 촉매화하여 티민(Thymine)을 형성하였다. 농도가 같은 조건에서 티민 OD 290nm 의 생성량은 티미딘 OD 290nm 보다 훨씬 많았다. 이는 발효액의 OD 290nm 을 뚜렷하게 증가시켰다. 이 원리에 근거하여 Thymidine phosphorylase을 생산할 수 있는 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis)에 대한 초기 선별법을 구축하였다. 해당 기초에서 자외선 돌연변이 조건을 최적화하였다. 즉 먼저 20초 동안 자외선으로 조사(irradiation)한 후, 5분 휴식하고 다시 한번 각각 10초, 15초, 20초씩 조사하여 자외선 치사율을 약 80%로 통제하였다. 이 조건을 이용하여 돌연변이 라이브러리를 구축하였다. 초기 선별과 재선별 결과, 돌연변이주 EB27과 EA42의 효소 활성이 각각 1.025 U/mg 습윤 세균(wet cells)과 0.916 U/mg 습윤 세균에 달했으며, 초기 균주보다 각각 50%와 35% 향상하였다. 동시에 유전적 안정성이 양호했다. |
