| 저자(한글) |
ZHANG, Wen-Shu,LIU, Xiao-Lan,ZHENG, Xi-Qun,SHI, Xi,DONG, Yu-Cheng |
| 초록 |
【목적】Paecilomyces militaris 심층(深層) 배양액에서 고순도, 고섬유소 용해성 플라스미노젠(plasminogen)의 분리정화법을 확립하여 그 효소학적 성질을 측정한다. 【기법】 황산암모늄 염석, Sephadex G-25 젤 투과 크로마토그래피(Gel Permeation Chromatography), Phenyl-Sepharose HP 소수성 상호작용(Hydrophobic interaction) 크로마토그래피, CM-Sepharose FF 약산성 양이온 교환(Weak cation exchange) 크로마토그래피, Superdex 75 젤 투과 크로마토그래피 등을 이용하여 Paecilomyces militaris 플라스미노젠에 대해 분리한다. 또 Lowry법을 이용하여 단백질 농도를 측정하고, 표준피브린 평판법(Fibrin plate method)을 이용하여 섬유소 용해성을 측정한다. SDS-PAGE로 그 순도를 감정하고 그에 따른 분자량을 확정하며, IEF법으로 등전점(Isoelectric point)을 측정한다. 【결과】연구결과, 자당과 콩깻묵을 배양기 주요기질로 할 때, Paecilomyces militaris 심층 배양은 적어도 2가지 플라스미노젠을 생성할 수 있다. 정화 후의 플라스미노젠Ⅱ 비활성은 800.46 U/mg이며, 총 정화배수는 30.07배였다. 플라스미노젠Ⅱ의 상대분자량과 등전점은 각각 32 kD와 9.3±0.2이다. 플라스미노젠Ⅱ은 하나의 당단백질이고, 총 당함량은 0.98%(W/V)이다. 이 효소는 순차적으로 Human fibrin의 alpha;, beta;, gamma; 사슬을 분해하였다. 최적의 pH와 온도는 각각 7.4와 41°C였다. Aprotinine와 PMSF가 본 플라스미노젠의 활성을 완전히 억제할 때, 본 플라스미노젠은 하나의 세린계 단백질(Serine protease)이라고 추측할 수 있다. 【결론】 단일한 고섬유소 용해성 플라스미노젠의 획득과 효소학적 성질의 확정은 이 효소개발이 신형 혈전용해제(Thrombolytic drugs)가 되도록 이론적 근거를 제공해 주었다. |
