| 저자(한글) |
GUO, Dong-hui,HAN, Jian,LIU, Wei-feng,FU, Zhen-zhou,ZHU, Qi-zhong,TAO, Yong |
| 초록 |
대장간균과 화농성 연쇄상구균(Streptococcus pyogenes)에서 UDP-포도당탈수소효소(UDP-glucose dehydrogenase)의 유전자 ecohasB와 spyhasB를 증폭하여, T7 발현 벡터인 pRX2에 삽입한 후, 재조합 플라스미드 pRXEB와 pRXSB를 구축하였다. 그리고 대장간균 BL21(DE3)에서 재조합 발현시키고, 니켈 칼럼으로 정제한 UDP-포도당탈수소효소의 효소학 성질(enzyme characterization)을 분석하였다. 효소학 성질에 대한 연구 결과: 반응 온도 30℃, pH 10인 spyHasB의 최적 조건에서 비활성이 12.2U/mg이었다; ecoHasB의 최적 반응 온도는 30℃, 최적의 pH가 9였으며, 이 조건에서 비활성이 5.55U/mg이었다. 파스튜렐라 멀토시다(Pasteurellamultocida)에서 증폭한 히알루론산(hyaluronic acid)의 합성효소 유전자 pmuhasA를 각각 ecohasB, spyhasB와 결합하여 공동 발현 벡터 pBPAEB와 pBPASB를 구축하였다. 그리고 대장간균 BW25113에 형질전환시키고, 생물 전환을 통하여 히알루론산(HA)을 생산하였으며, 형질전환 조건을 최적화하였다. 실험 결과: 재조합 균주에 대한 히알루론산의 형질전환 과정에서 UDP-포도당탈수소효소의 활성이 강할수록 안정성이 더욱 양호했으며, HA의 생산량이 더욱 높았다; 형질전환 조건을 최적화한 후, 진탕 플라스크에서 pBPAEB/BW25113과 pBPASB/BW25113의 생산량은 각각 1.52와 1.70g/L로서, 기존에 보고한 것보다 2~3배 증가하였다. |
