| 초록 |
단순포진 바이러스 Ⅱ형(herpes simplex virusⅡ, HSV-2)에 의해 코딩된 microRNA-H4-5p(miR-H4-5p)는 바이러스 신경 독성 단백질 ICP34.5mRNA과 상호 결합하는 한편 그의 발현을 억제한다. 따라서 바이러스 감염의 세포 독성 작용을 감소하고 세포의 바이러스 면역 작용을 약화한다. 그러나 miR-H4-5p가 숙주 세포를 표적으로 작용할 수 있는지 여전히 명확하게 밝혀지지 않았다. 본 연구 결과, miR-H4-5p는 세포 주기 의존성 키나아제(cyclin-dependent kinase-like 2, CDKL2) 유전자의 표적화 발현을 통해 악티노마이신 D(actinomycin D, ActD)에 의해 유도된 아프리카 녹색원숭이의 신장 상피세포(African green monkey kidney cells, Vero) 사멸을 저항하는 것이 확인되었다. 생물 정보학 기법을 통해 온라인으로 miR-H4-5P의 잠재적인 표적 유전자 CDKL2의 결합 위치를 예측하고, 이중 루시페라아제(Luciferase) 시스템을 구축하여 miR-H4-5P의 표적화 작용을 검사하였다. 데이터 분석 결과, miR-H4-5P로 루시페라아제의 발현을 효과적으로 억제할 수 있는 것으로 확인되었다. qPCR와 웨스턴 블롯을 이용한 데이터 분석 결과, miR-H4-5p가 mRNA 수준과 단백질 수준에서 CDKL2 발현을 억제하는 것으로 확인되었다. 과발현 벡터 pmR-mcherry/miR-H4-5p(cherry/H4-5p)를 구축하고 cherry/H4-5p와 pmR-mcherry 빈 플라스미드를 Vero 세포에 형질전환하였다. 24시간 후 1 μg/mL의 종말 농도를 가진 악티노마이신 D로 세포 사멸을 유도하였다. MTT 기법, 유세포 분석기술과 웨스턴 블롯을 통해 Bax와 Bcl-2의 발현을 검사하였다. 데이터 분석 결과, miR-H4-5p는 ActD에 의해 유도된 Vero 세포 활성의 감소를 억제하는 것으로 확인되었다. 본 실험 결과, miR-H4-5p는 숙주세포 유전자에 대한 표적화 조절을 통해 세포 사멸을 억제하고, 이 방식을 통해 HSV.2 잠재적 감염의 구축 과정에 공동 참여하는 것으로 확인되었다. 그러나 이런 사멸 작용의 억제 통로 및 그 메커니즘은 여전히 명확하게 밝혀지지 않았다. 따라서 miR-H4-Sp로 더욱 많은 숙주 유전자를 표적할 수 있는지 심층적인 실험 검증이 필요하다. |
